第二章 培养基的组成和配.pptVIP

第二章 培养基的组成和配制法;主要内容及其要求： 1. 理解植物组织培养的培养基成分 2. 掌握培养基的配制方法和程序 3. 知道常用培养基的配方及其特点;培养基是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一。 植物组织培养成功与否，一方面取决于培养材料本身的性质；另一方面取决于培养基的种类和成分。 ;（1）无机营养物 （2）糖类 （3）维生素类 （4）氨基酸及有机附加物 （5）植物生长调节物质 此外，培养基中如加入0.5～1.0％的琼脂即 为静止培养的固体培养基，否则为悬浮培养 的液体培养基。　　; 配制好的母液包括大量元素、微量元素、铁盐及维生素和氨基酸。常用的配制母液方法是扩大一定倍数的大量元素分别称量后，分别溶解后再配制大量元素母液，微量元素按统一的扩大倍数分别称量和溶解在一起配制成微量元素母液，铁盐，维生素类和aa配制成母液。配好的母液平时应该贮存在2-4℃冰箱内。;配母液时应注意各种化合物的组合以及加入的先 后顺序，以免发生沉淀。通常，最好把每种试剂 单独溶解后再与别的也已完全溶解的药品混合， 或者待前一种化合物完全溶解后再加入后一种化 合物。配好后，在容器上贴上标签，注明配制日 期，母液倍数和名称。如果各类母液一旦出现沉 淀或者可见微生物的污染，应立即停止使用，重 新配制。;对生长调节物质配制成母液时，一般情况下配制成0.5mg/ml的母液。 由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同： (1)?IAA和IBA可先用少量95%酒精溶解，再加水定容，摇匀后贮于试剂瓶中。 (2)NAA可溶于热水或少量95%酒精中，再加水定容至一定体积。 (3)2，4-D不溶于水可用1mol/LNaOH的溶解后，再加水定容。 (4)KT和6-BA应先容于少量1mol/LHcl 中,再加水定容。;母液配制流程图;　 称量药品 ;母液保存：;培养基的配制程序 （1）首先在烧杯内放一定量的蒸馏水，以免加入药液时溅出。 （2）再按母液顺序，根据不同母液的不同倍数取规定的量。 （3）加完后一并倒入已溶化的琼脂中，再放入蔗糖，定容至所需体积，继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，根据培养基配方及培养基体积加入所需要的生长调节物质。;（4）当培养基配制好后应立即进行PH值的调整。最好用酸度计。如无条件也可用精密PH试纸， pH值可用1mol· L-1KOH（或NaOH）溶液和2mol · L-1HCI调整。 （5）配制好的培养基要趁热分装，分装时可采用烧杯漏斗直接分注。一般以占试管或三角瓶等培养容器的1/4—1/3为宜。 （6）由于未经灭菌处理的培养基既可能带有各种杂菌，同时又是各种杂菌良好的生长繁殖场所，因此培养基分装后应立即置于灭菌锅内进行灭菌 （7）高压灭菌后的培养基凝固后，宜将培养基放倒培养室中预培养2—3天若没有杂菌污染才可放心使用。;培养基配制方法;培养基配制室Medium-making room 　 ;不同植物材料常需要改变配方，如维持生长和诱导细胞分裂和分化的培养基配方就不同。 配方的种类很多，目前以MS（Murashige and Skoog）培养基配方作为最常用的一种基本培养基，它利于一般植物组织和细胞的快速生长。 ;在进行组织培养研究时应根据研究目的和培养植物的种类来确定培养基的组成，除营养、诱导作用外还应当注意离子平衡和毒性问题，如水一般都采用重蒸馏水，无机盐类一般都需用分析纯的药品， pH值可用1mol· L-1KOH（或NaOH）溶液和2mol · L-1HCI调整。 有时可以用普通药??代替，但须注意这些药品不仅应有营养价值，还须无毒。如果在工业上使用大缸深层培养细胞或组织生产有效成分和生物制品、应用培养基的量将要以吨位计量时，则采用什么代用品较为经济实用更应慎重考虑。;作业题： 1、培养基各种母液如何配制？ 应该注意哪些问题？ 2、培养基如何配制？