T-SPOTTB不含医院名称浅析.ppt

; ; 公司成立于2003年，依托牛津大学科研技术开发新产品 基于T细胞检测的技术平台最先获得认可 产品：T-SPOT?.TB 在欧洲、美国、加拿大和其它地区正式上市 ;结核病——全球关注的问题 全球 20亿人口感染结核 新增活动性结核病人约900万/年 每年130万患者死亡 中国 450万活动性结核病人 新增活动性结核病人约145万/年 死亡人数约13万/年 ;活动性结核与潜伏感染;控制结核的关键; ;γ-干扰素释放实验 （IGRAs，interferon- gamma release assays ） 酶联免疫斑点技术 （ELISPOT，Enzyme-Linked ImmunoSpot assay） 结核杆菌特异抗原 早期抗原靶6（ESAT-6，early secreted antigenic target 6 ） 培养滤液蛋白10（CFP 10，culture filtrate protein 10 ） ;γ-干扰素释放实验（IGRAs）;结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞， 效应T淋巴细胞再次受到结核抗原刺激时会分泌多 种细胞因子（IFN-γ）。因此，检测效应T淋巴细 胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。 由于效应T细胞存活时间很短，而且具有特异 性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指 标，无论是否有临床症状。 基于IGRAs原理的产品目前已被美国、加拿大、英国、 德国、意大利、瑞士、法国、荷兰、日本等国家写入本国 的结核诊疗指南中 ;1983年，在南北两个半球地理位置相距遥远的两个研究小组几乎同时、独立地创立了这项技术。 一个研究小组位于澳大利亚西部的柏斯Peth，牵头人是当时正在当地Margaret 女王医院儿童医学研究所攻读博士学位的Jonathon D. Sedgwich （Sedgwick JD et. al., 1983）。另一个研究小组位于北欧瑞典城市哥德堡Gothenburg，带头人是哥德堡大学医学微生物系的学者Cecil C. Czerkinsky （CzerkinskyCC et. al., 1983a）。;近二十多年来，随着抗体制备、PVDF膜材料等技术改良，ELISPOT 分析技术已经是当世公认的最灵敏的抗原特定T细胞的体外检测技术 结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术，能够在单细胞水平检测细胞因子的分泌情况，灵敏度高。 其技术原理，可一句话概括为：用抗体捕获培养中细胞所分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色方式将其表现出来（Sedgwick JD 2005）。 ;酶联免疫斑点技术（ELISPOT）; 由结核杆菌基因组RD1区相同的操纵子编码的蛋白 所有的卡介苗（BCG）均丢失该基因序列 绝大多数的环境分枝杆菌也不存在RD1区 ; 采用γ-干扰素释放实验原理，依靠结核特异 抗原保证效应T淋巴细胞的特异性 结合酶联免疫斑点技术的特性，提高检测灵敏度;三、试剂及检测过程;试剂盒主要原材料研究;试剂盒主要组成成分 结核杆菌特异抗原（ESAT-6、CFP 10） 植物血凝素（PHA）对照抗原 预包被的培养板、标记二抗、底物显色液 ;国外上市情况 2004年-英国MHRA认证和欧盟CE认证（EU） 2005年-加拿大上市许可 2006年-韩国上市许可 2008年-美国FDA的PMA认证 2010年-中国、新加坡和俄罗斯的产品注册; 采集样本（外周抗凝全血） 密度梯度离心分离外周血 单个核细胞（PBMCs） 洗涤PBMCs ; 把PBMCs与结核特 异抗原一同加入到 预包被抗γ-干扰素 抗体的培养孔中 37℃二氧化碳孵育16-20小时; 洗涤培养孔 加标记二抗 孵育1小时; 洗涤培养孔 加显色液 用蒸馏水终止反应 ; 1个斑点=1个效应T细胞 ;阴性结果; ;结核病的常规诊断方法;1、方法学比较——细菌学;2、结核菌素皮试——PPD;结核菌素皮试——PPD;T-SPOT.TB 与皮试的比较;方法学比较—???TST Vs T-SPOT.TB;例：研究数据;方法学比较——TST Vs T-SPOT.TB; ;1、将该产品（方法学IGRA）写入诊疗指南的国家（Guidelines）;;指南解读（一）;指南解读（二）;指南解读（三）;2、应用方向;对于“涂阴”结核病患者有很高的检出率（94.2%） 对于肺外结核病患者有很高的检出率（90.3%） 对于结核潜伏感染的检测，不受卡介苗（BCG）接种影响，比PPD检测更准确 不能够提示临床患者的病变部位 不能够根据斑点数量的多少来判断受试者是活动性结核病患者或是潜伏感染者 对于结核/癌症患者的鉴别诊断，须结合临床症状进行判断 ;科室特点;科室特