HPLC法测定注射用头孢噻肟钠的有关物质.docVIP

　　HPLC法测定注射用头孢噻肟钠的有关物质 【摘要】 改进HPLC测定注射用头孢噻肟钠中有关物质的方法。在美国药典和欧洲药典(英国药典)方法的基础上，优化了两种不同流动相系统，用梯度洗脱对注射用头孢噻肟钠的有关物质进行了分离。结果样品中各成分的分离度及检出灵敏度完全满足有关物质限度的测定要求。改进后的RPHPLC方法能更加真实有效的反映注射用头孢噻肟钠的有关物质含量，可有效控制产品的质量。 【关键词】 头孢噻肟钠； 有关物质； 高效液相色谱法 ABSTRACT To improve the method for determination of related substances of cefotaxime sodium for injection. On the basis of USP and EP (BP) methods, different mobile phase systems ized. Gradient elution e sodium and its related substances. The resolution and sensitivity of related substances it ethod ple and selective. It could be used to control the quality of product effectively. KEY 10A PDA检测器，DGU14A在线脱气机)；MilliQ纯水机(Millipore公司)。1.2 药品与试药 注射用头孢噻肟钠(批号0406132)由哈药集团三精制药有限公司提供；注射用头孢噻肟钠(批号050103)由浙江亚太药业股份有限公司提供；注射用头孢噻肟钠(批号050321025)由苏州东瑞制药有限公司提供。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil Gold(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长235nm；流速1.0ml/min；进样体积10μl。 流动相I(梯度洗脱) 流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液∶甲醇(86∶14)；流动相B为0.05mol/L磷酸盐缓冲液∶甲醇(60∶40)。 0.05mol/L磷酸盐缓冲液的配制 取7.1g磷酸氢二钠至1000ml量瓶中，加水溶解至接近刻度，用磷酸调节溶液pH至6.25，加水定容至1000ml)，梯度洗脱程序见表1。 流动相II(等度洗脱) 流动相为磷酸盐缓冲盐∶甲醇(85∶15)。 磷酸盐缓冲液的配制 3.5g磷酸二氢钾和11.6g磷酸氢二钠至1000ml量瓶中，加水溶解至接近刻度，调pH至7.0，加水定容至1000ml。 2.2 样品溶液的配制 取头孢噻肟钠40mg至50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。 2.3 流动相I与流动相II的比较 (1)分离效果的比较 流动相I 流动相I系统为美国药典分析头孢噻肟钠采用的系统。完全按照流动相I的梯度洗脱程序，发现主峰与前后相邻的杂质不能很好的分离。针对分离情况，将梯度洗脱程序进行相应调整后，调整后的洗脱程序如表2所示。结果分离效果较好，主要分离出样品中含有的12个杂质(图1)。 流动相II为欧洲药典(英国药典)在分析头孢噻肟钠采用的系统。完全按照流动相II的等度洗脱程序，发现主峰前分离出的杂质个数与流动相I的相同，但是主峰后的杂质在1h之内没有出峰。为了缩短分析时间，将主成分出峰后改为梯度洗脱，样品色谱图显示45min之内可以将主峰后的杂质完全洗脱，洗脱程序如表3所示，但是色谱基线漂移比较严重(图2)。 (2)最低检出限的比较 两种流动相在同一根色谱柱上得出的头孢噻肟钠的最低检出限(以S/N=3表1 流动相I梯度洗脱程序 计)基本一致，为100ng。 2.4 两种流动相比较结果小结 通过对流动相I和流动相II在同一根色谱柱上分离效果及最低检出限的比较，发现对流动相比例作适当调整后，流动相I和流动相II均能检出相同数量的杂质，分离效果均较好，但是流动相II为等度洗脱，主成分后杂质的酯溶性较强，若维持原流动相中有机比例不变，主成分后杂质在1h内不能出峰，将主成分出峰后改为梯度洗脱，增加流动相中有机溶剂的比例，可将主峰后杂质洗脱，但是相对于流动相I，调整后流动相II的基线漂移幅度较大，且梯度洗脱的流动相为纯水相和纯有机相，而流动相I中两相流动相A和流动相B均为加有不同有机溶剂比例的混合相，有利于色谱条件的稳定，同时两种方法的最低检出限基本一致，所以最终采用流动相I的洗脱方法进行粗放性考察。 2.5 系统适应性实验溶液的选择 美国药典中系统适应性实验溶液配制 取1ml对照品溶液加7ml水和