HPLC法测定荣筋片中橙皮苷的含量.docVIP

　　HPLC法测定荣筋片中橙皮苷的含量 作者：辛丹，王跃飞，王强，潘桂湘 【摘要】 目的 建立荣筋片中橙皮苷的HPLC含量测定 方法 。方法 采用Agilent C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-0.3%磷酸（体积比22∶78）作为流动相，流速为1.0 mL/min，紫外检测波长为283 nm，柱温为35 ℃。结果 在0.0655～2.096 μg范围内,进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.3%，RSD为0.84%（n=6）。结论 本法灵敏、简便、准确，重现性好，可用于荣筋片的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法；荣筋片；橙皮苷 　　Abstract:Objective To determine the content of aurantiamarin in Rongjin tablets by HPLC.Methods The analysis n (4.6 mm×250 mm，5 μm). The mixture of acetonitrile-0.3% phosphoric acid (22∶78) obile phase. The floL/min. The detection . The column temperature ethod ethod is sensitive,simple,accurate and reproducible for the quality control of Rongjin tablets. 　　Key arin 　　荣筋片为天津中医药大学第二附属 医院 的医院制剂，适用于严重的关节变形和强直性脊柱炎等病症的复方制剂，临床实验疗效显著，主要由蒺藜、沙苑子、陈皮、当归、续断、熟地黄等药物组成，具有补肾通督、养血柔筋、通络止痛的作用。方中陈皮的主要成分橙皮苷具有较强的抗炎作用［1］，且在中药新药的研发中,橙皮苷常常被选为指标成分而用于定性和定量 研究 。因此，为了有效控制荣筋片的内在质量，选取方中陈皮所含的橙皮苷作为质控指标，采用HPLC法测定其含量，结果满意。 　　1 仪器与材料 　　 　　仪器：pom×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.3%磷酸（体积比22∶78），检测波长为283 nm，流速为1.0 mL/min，采用35 ℃柱温， 理论 塔板数按橙皮苷色谱峰 计算 不低于3 000。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　 　　精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成0.02 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取荣筋片数片，研细，取约1 g，精密称定，置100 mL三角瓶中，加甲醇25 mL，称重，加热回流处理20 min，取出放冷，称重，补甲醇至原量，摇匀，过滤（0.45 μm微孔滤膜），续滤液作为供试品溶液。 　　2.4 阴性对照溶液的制备 　　 　　原方去陈皮药材，按制剂工艺进行制备，得缺陈皮的阴性制剂。取阴性制剂1 g，按“2.3”项下操作，制备阴性制剂对照液。 　　2.5 专属性试验 　　 　　按“2.1”项下的色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：橙皮苷对照品和供试品色谱图中橙皮苷峰与其他组分峰基线分离，分离度大于1.5，保留时间为9.342 min；阴性对照色谱图中与橙皮苷对照品以及供试品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对橙皮苷的测定无干扰,见图1。 　　A.对照品; B.样品; C.阴性对照（缺陈皮） 　　图1 HPLC色谱图（略） 　　Fig.1 HPLC Chromatograms 　　2.6 线性关系考察 　　 　　精密称取于40 ℃真空干燥至恒重的橙皮苷对照品5.24 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成橙皮苷标准贮备液（209.6 μg/mL）。分别配成209.6、104.8、52.4、26.2、13.1、6.55 μg/mL的系列对照品溶液，分别吸取上述溶液各10 μL，注入液相色谱仪测定，以峰面积（A）为纵坐标，对照品质量浓度（ρ）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A＝16603ρ＋9628.4，r=0.9999，橙皮苷质量浓度在0.0655～2.096 μg/mL之间呈良好的线性关系。 　　2.7 精密度试验 　　 　　精密吸取同一份供试品溶液，连续进样6次，测定橙皮苷峰面积积分值，RSD为0.13%（n=6），表明精密度良好。 　　2.8 稳定性试验 　　按“2.3”项下操作制备1份供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h测定橙皮苷面积，RSD为0.48%，结果显示供试品溶液在0～12 h