RPHPLC法测定小鼠血浆中蒿甲醚的浓度.docVIP

　　RPHPLC法测定小鼠血浆中蒿甲醚的浓度 【摘要】 目的 建立测定小鼠血浆中蒿甲醚浓度的 方法 。方法 采用RPHPLC法，色谱柱为Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm,5 μm），流动相为甲醇水（体积比85∶15）；流速为1.0 mL/min；检测波长为210 nm；柱温为室温。利用甲基叔丁基醚对小鼠血浆及组织中蒿甲醚及蒿乙醚进行提取后进行测定。结果 蒿甲醚与蒿乙醚的色谱峰分离良好并且出峰时间相近，以蒿乙醚为内标测定血浆中蒿甲醚符合方法学要求，血浆标准曲线在一定范围内线性关系良好（R2=0.9991,n=5）,高、中、低3个浓度的回收率均为97%以上，日内及日间RSD均小于3%。结论 建立的方法可简单快速测定蒿甲醚在小鼠血浆中的浓度，为内标法测定蒿甲醚在动物血浆中的浓度提供思路。 【关键词】 蒿甲醚；蒿乙醚；高效液相色谱法；内标法；血药浓度 　　Content analysis of artemether in mice plasma by RPHPLC 　　ethods Artemether and arteehter in mice plasma ethyl tertbutyl ether before detection, then analyzed on a Diamonsil C18 column（150 mm×4.6 mm, 5 μm）. The mobile phase consisted of methanolL/min. The and room temperature ination of artemether.Results The chromatographic peaks of artemether and arteether ilar retention times at the selected HPLC condition. There ether analysis ore than 96% during high, middle and loether. RSDs of ether in plasma could be analyzed easily and rapidly by the established HPLC method. 　　Key ether; arteether; HPLC; inner standard method; blood drug level 　　青蒿素（qinghaosu,QHS）类化合物是我国在90年代初期开发的具有良好抗疟疾活性的倍半萜类化合物［1］。其中，青蒿素的脂溶性衍生物蒿甲醚(artemether,ARM)近年来颇为引人关注，其抗疟疾效果是青蒿素的10倍［2］。最近，青蒿素类化合物在抗癌领域也受到越来越广泛的关注，尤其是在抗非小细胞肺癌及白血病 治疗 方面有显著作用［3-4］。 　　蒿甲醚的含量测定方法 　　2.4 血浆中蒿甲醚含量测定标准曲线的制备 　　取3份250 μL小鼠血浆，分别加入6.32 mg/mL蒿甲醚甲醇溶液10、20、30、40 μL和63.2 mg/mL蒿甲醚甲醇溶液15 μL，15.82 mg/mL的内标蒿乙醚20 μL，以蒿甲醚与蒿乙醚峰面积的比值为横坐标，蒿甲醚在小鼠血浆中的浓度为纵坐标作图得内标法的线性关系曲线，y=243.44x+4.152，R2=0.999 1，线性范围0～3.792 mg/mL。　　A.甲醇溶液中蒿甲醚(ARM)与蒿乙醚(ARE)的色谱图 　　B.提取后的空白血浆色谱图 　　C.提取后的空白血浆中添加蒿甲醚与蒿乙醚后的色谱图 　　D.甲醇溶液中青蒿素(QHS)与蒿甲醚的色谱图 　　图2 高效液相色谱图（略） 　　Fig.2 HPLC chromatograms 　　2.5 提取回收率 　　按“2.1.2”项下处理血浆样品后，高、中、低3个浓度的蒿甲醚在小鼠血浆中的提取回收率(n=3)分别为(84.8±1.6)%，(83.5±1.1)%，(73.0±2.9)%。 　　2.6 方法 回收率 　　分别量取250 μL小鼠血浆，精密加入6.32 mg/mL蒿甲醚甲醇溶液15 μL,35 μL，63.2 mg/mL蒿甲醚甲醇溶液7 μL, 按“2.1.2”项下处理后测定色谱峰面积，代入标准曲线换算成实际测定浓度， 计算 低、中、高3个浓度的回收率（n=3）分别为(98.7±1.3)%(98.2±1.7)%,(96.8±2.1)%。 　　2.7 精密度试验 　　分别量取250 μL小鼠血浆，精密加入6.32 mg/mL蒿甲醚甲醇溶液15 μL,35 μL，63.2 mg/mL蒿甲醚甲醇溶液7 μL，按“2.1.2”项下处