不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定.docVIP

　　不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定 作者：王言才 段金廒 华永庆 宿树兰 【摘要】 　　目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法，以甲醇-水（32∶68）为流动相，检测波长为250 nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0.204～2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），回收率为98.7%(n=5)，精密度RSD=0.86%。总黄酮浓度在4.08～16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0.999 8)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。 【关键词】 柴葛 粉葛 葛根素 总黄酮 高效液相色谱 　　Abstract:ObjectiveTo study the determination method of puerarin and isoflavones in Pueraria lobata (ethodsThe separation ed on RPHPLC obile phase of CH3OH-H2O (32∶68V/V) solution and the detection for the determination of Pueraria. UV-spectrophotometry for the determination of isoflavones.ResultsPuerarin and other peaks l(r=0.999 8).Conclusion This method is sensitive, accurate and reproducible. It can be used as the quality control method of Pueraria lobata and drug. 　　Key sonii； Pueraria； isoflavones； HPLC 　　葛根为豆科植物柴葛Pueraria lobata (illenium数据处理系统;m ×250 mm , 5 μm)；流动相∶甲醇-水（32∶68）；流速1 ml/min；检测波长250 nm；柱温22℃；进样体积10μl。理论板数按葛根素峰 计算 不低于5000。在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3 min左右，对照品与样品的色谱图见图1。 　　图1 对照品Ⅰ、柴葛索氏提取Ⅱ、粉葛索氏提取Ⅲ的HPLC色谱图（略） 　　2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg，甲醇定容于25 ml量瓶。分别移取0.5，1.0，2.0，2.5 ml于5 ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。 　　2.1.3 供试品溶液的制备 　　热回流提取法：精密称取柴葛、粉葛粉末（过50目筛）各0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称重。回流提取30 min，放冷，称重并以30%乙醇补足减失重量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。 　　索氏提取法：称取柴葛、粉葛粉末各0.5 g, 精密称定，以甲醇为提取剂提取4h，过滤，浓缩提取液并用甲醇定容于10 ml量瓶。超声处理30min，取上清液以水定容于10 ml量瓶，待测。 　　2.1.4 线性关系考察取对照品溶液，按照“2.1.1”色谱条件进样10 μl，葛根素进样量X(μg)为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为：Y= 3.507 6×106X + 3.274 5×104，r = 0.999 9。结果表明，葛根素进样量在0.204～2.04μg范围内与峰面积线性关系良好，可用外标两点法 计算 含量。 　　2.1.5 精密度考察在“2.1.1”项色谱条件下，吸取同一对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积，RSD=0.8%，表明进样与峰面积积分的精密度良好。 　　2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份，按“2.1.3”项下的方法制样后，以“2.1.1”项色谱条件进样10 μl，测定葛根素的峰面积，按外标法计算含量，RSD=2.8%，表明分析方法重复性良好。 　　2.1.7 稳定性考察精密吸取对照品溶液10 μl，分别在0，1，2，4，8，12，24，48 h时进样，在 “2.1.1”项下色谱条件下测定峰面积，其RSD值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48 h内稳定，因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。 　　2.1.8 回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份，20 mg/份，精密称定后，每份加入浓度为0.204 mg/ml的对照品溶液2.5