丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白的影响.docVIP

　　丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关蛋白的影响 作者：付笑飞 赵松 刘东雷 王建军 【摘要】 　　目的 探讨丙泊酚对大鼠肺缺血再灌注损伤（LIRI）细胞凋亡及相关蛋白的影响。方法 雄性SD大鼠42只，随机分为3组：假手术组(S组)、缺血再灌注组（IR组）、丙泊酚组（P组）。IR组、P组均建立大鼠原位肺缺血再灌注模型（缺血1 h，再灌3 h），P组于缺血前30 min静脉输注丙泊酚5 mg·kg-1·h-1。实验结束后立即取左肺标本，用免疫组化法检测Bcl2与Bax蛋白表达情况，原位细胞凋亡检测（TUNEL）法检测肺上皮细胞凋亡指数（AI），同时光镜下观察肺组织的病 理学 变化。结果 与S组相比，IR组凋亡指数增加，肺组织中Bcl2、Bax表达均增强，Bcl2/Bax比值明显降低 (P＜0.05)；与IR组相比，P组Bcl2蛋白表达增加、Bax蛋白表达减少和细胞凋亡指数降低(P＜0.05)，光镜下肺组织病理学变化明显轻于IR组。结论 丙泊酚对大鼠LIRI具有保护作用，其机制可能与调控Bcl2/Bax蛋白表达从而减轻肺细胞凋亡有关。 【关键词】 丙泊酚；肺缺血再灌注；凋亡 　　在肺缺血再灌注损伤（lung ischemia reperfusion injury，LIRI）的过程中细胞凋亡是导致肺组织损伤的重要原因之一〔1〕。丙泊酚（propofol）是临床常用的静脉麻醉药，已有研究表明其对LIRI有一定的保护作用〔2〕，但其机制尚不完全清楚。本研究通过建立大鼠在体LIRI模型，观察丙泊酚对LIRI肺细胞凋亡及相关蛋白的影响，并探讨其可能机制。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料及实验动物 　　清洁级健康雄性SD大鼠42只，体重250～300 g（同济医学院动物饲养中心提供）。主要试剂：鼠抗Bcl2、Bax抗体（Santa Cruz公司，美国）、原位细胞凋亡检测（TUNEL）试剂（Roche公司，德国）、二步法免疫组化检测试剂（PV6001）(北京中杉金桥生物科技有限公司)。主要药物：丙泊酚注射液（Astra Zeneca公司，意大利）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物分组及模型制备 　　实验动物随机分为3组，每组14只，分别为：假手术组(S组)，除不作缺血处理外，余同其他组；肺缺血再灌注组（IR组），缺血1 h，再灌3 h；丙泊酚组（P组），缺血前30 min静脉输注丙泊酚5 mg/kg·h-1，缺血1 h，再灌3 h。IR组和P组每组又分为两个亚组，再灌时间分别为1、3 h，每个亚组7只大鼠。 实验前4 h禁食，腹腔注射4%戊巴比妥50 mg/kg麻醉后，仰卧位固定。行颈部气管切开、插管，并游离右侧颈静脉和颈动脉。接动物呼吸机行机械通气维持呼吸，右侧经静脉插管、固定，接微量注射泵；然后左侧第5肋间开胸，钝、锐性结合游离左肺门。静息5 min后，于呼气末用无创血管夹阻断左左主支气管、左肺动脉和左肺静脉。阻断1 h后开放，进行再灌注1、3 h。于1、3 h实验结束时结扎肺门取出左肺待用。 　　1.2.2 肺组织Bcl2、Bax蛋白检测 　　采用二步免疫组织化学法（PV）法检测Bcl2、Bax蛋白的表达情况。各组标本用10%甲醛固定，石蜡包埋切片，严格按照免疫组织化学试剂盒进行操作，阳性标准为细胞质染色呈棕色，阴性对照组用PBS代替一抗。在显微镜下观察，每张切片随机选取5个视野，使用MIAS2000图像分析系统分析阳性区域平均光密度值（OD），以OD值大小代表阳性产物表达的多少。 　　1.2.3 原位细胞凋亡检测 　　 　　用TUNEL法检测细胞凋亡情况。光镜下观察细胞核染为棕黄色为凋亡细胞。每例标本的切片随机选取5个高倍镜视野（40×10），按凋亡指数（AI）=（凋亡细胞数/总细胞数）×100% 计算 。 　　1.2.4 肺组织病理学检测 　　4%多聚甲醛固定24 h，常规石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下（×200）进行观察。 　　1.3 统计学处理 数据均采用SPSS13.0软件分析，数据以x±s表示，组间比较采用t检验和单因素方差分析。 　 　2 结 果 　　2.1 肺组织Bcl2、Bax蛋白表达及Bcl2/Bax比值变化 　　与S组相比，IR组、P组肺组织Bcl2、Bax蛋白含量均明显增加（Plt;0.05）；与IR组相比，P组Bcl2蛋白表达明显增加，Bax表达减少（Plt;0.05），见表1。表1 再灌注后不同时相Bcl2、Bax蛋白（OD值）及Bcl2/Bax比值变化(略) 　　2.2 肺细胞凋亡指数（AI）变化 　　与S组相比，IR组、P组肺AI值均明显增加（Plt;0.05）；与IR组相比，P组各时相AI值减少，差异有统计学意义（Pl