02-PCR技术原理及频匿应用-刘晓雪.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * PCR技术应用 研究 基因克隆，DNA测序，分析突变 诊断 细菌、病毒、寄生虫检测，诊断 人类基因组工程 遗传图谱的构建，DNA测序，表达图谱 法医 犯罪现场标本分析 肿瘤 各种肿瘤检测 其他…… Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. * 穆利斯(Kary Mullis)，美国化学家。1944年生于美国加里福尼亚州的拉霍亚。穆利斯于1985年发明了聚合酶链式反应(Polymerase Chaim Reaction，PCR)。这是一项用于扩增脱氧核糖核酸(DNA)技术，反应两小时可使目标DNA扩增106-107倍。由于PCR方法简便，一个初学者略加培训，即可在两周左右完成一些常规的基因扩增实验。PCR创建后，迅速在医学临床，法医鉴定，古生物基因分析和生物工程等方面广泛应用。由于穆利斯创造发明了上述新的生物学研究方法，对生物学的发展作出了突出贡献，而获得了1993年诺贝尔化学奖，获奖时年49岁。同年获奖的还有史密斯。此时，穆利斯在美国加州一家公司任董事长。 　 　穆利斯的发明，有一个偶然的闪念起了很大作用。那是在1983年某日的深夜，猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。1985年发明得以实现，不仅获得了诺贝尔奖金，还荣获了日本颁发的LLLLLLLLLLLLLL.P;.,45万美元的奖金。穆利斯发明的PCR从20世纪80年代末开始用来扩增特定的DNA片段，此法也称“基因放大”，它在21世纪也将是遗传工程的研究热点。穆利斯也随之闻名世界。 　史密斯传略 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 基因 mRNA 蛋白质多肽链 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. mRNA cDNA 杂化双链 逆转录酶 ＤＮＡ聚合酶 PCR扩增 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 4）多重PCR：在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR称为多重PCR。其结果是产生多个PCR产物，用于检测特定基因序列的存在或缺失。 电泳 引物 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 某些病原微生物，某些遗传病或癌基因，型别较多，或突变或缺失存在多个好发部位，多重PCR可提高其检出率并同时鉴定其型别及突变等可系统应用的有:乙型肝炎病毒的分型;乳头瘤病毒的分型;单纯疱疹病毒的分型;杜氏肌营养不良症的分型及癌基因的检测等. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 多重PCR的特点 ①高效性，在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是用一滴血就可检测多种病原体. ②系统性，多重PCR很适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检. ③经济简便性，多种病原体在同一反应管内同时检出，将大大的节省时间，节省试剂，节约经费开支，为临床提供更多更准确的诊断信息. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 5）LP-PCR（Labelled primers) 利用同位素、荧光素等对ＰＣＲ引物5’端进行标记, 用以直观地检测目的基因。 与常规PCR相比更为直观，省去了限制性内切酶酶切及分子杂交等繁琐步骤，而且可同时检测多种基因成分 特别适合大量临床标本的基因诊断 目前该方法只对PCR