毒理学实验导论.pptVIP

四、步骤 动物选择 剂量设计：5-8个剂量（一般不设对照组） 动物称重、编号、标记 受试物配制 灌胃：0.1-0.2ml/10g体重 观察：急性毒性试验原始记录 剂量设计： 预实验：文献LD50=50-92mg/kg 设置400、200、100、50、25mg/kg 五个剂量，每剂量3只鼠。 找出LD100和LD0 组距i=（lgLD100-lgLD0）/（n-1） n是实验组数；i是正式实验中两个相邻剂量组的剂量对数之差 A: lg200=2.301 B: lgx=2.301-i C: lgy=2.301-2i D: lgz=2.301-3i E: lgw=2.301-4i F: lg50=1.690 1：k系列稀释法 最大剂量组浓度C1 （母液浓度）C1=200mg/kg=2mg/10g 0.2ml/10g→2mg/0.2ml=10mg/ml 每组最大体积m=20ml（设每只鼠需2ml） k：相邻两组剂量之比=64.89/85.981=0.75 V总=m/（1-k）=81.53ml（各组母液和） 敌敌畏原液浓度：1400mg/ml 稀释成10mg/ml，81.53ml的母液 1400mg/ml*Vx=10mg/ml*81.53ml Vx=0.582ml V水=81.53-0.582 第1组 20ml 第2组 剩余母液+20ml水→混匀后取20ml 以此类推 LD50计算：LD50及95%可信区间 计算公式 m=Xk-i(∑p-0.5) m：lgLD50 i:相邻两剂量组对数值的差 Xk：最大剂量的对数值 P：死亡率 q:存活率 n：每组动物数 ∑p=各剂量组死亡率总和 五、评价：毒性分级、毒性特征 六、讨论： 实验二皮肤刺激性/腐蚀性试验（豚鼠） 试验目的 确定化学物对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度，为制定防护化学物对皮肤的刺激保护措施提供依据。 皮肤刺激性(Dermal Irritation)：皮肤涂敷受试样品后局部产生的可逆性炎性变化。 皮肤腐蚀性(Dermal Corrosion)：皮肤涂敷受试样品后局部引起的不可逆组织损伤。 试验的基本原则 将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。 采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。 强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5，由于可预见其腐蚀特性，不必做本试验； 若已知受试样品有很强的经皮吸收毒性（LD50≤200mg/kg bw）的物质不必进行本试验； 试验方法 1、受试样品 液态受试样品采用原液或人类实际应用浓度 固体受试样品经研磨，过100目筛后用水或适当的赋形剂（如凡士林、阿拉伯树胶、乙醇和水、羧甲基纤维素、聚乙二醇、丙三醇、植物油和矿物油等）按一定比例调制，以保证与皮肤充分接触。 2、实验动物和饲养环境 首选健康成年白色家兔，其次为白色豚鼠。 至少需要4只健康成年动物（雄性和/或雌性均可）。 每只动物相邻的未处理的皮肤可作为对照。 每只单笼饲养，试验前动物要在实验室中适应3d。 常规饲料喂养，自由饮水 3、剂量设计 受试样品0.5ml(g)，均匀涂布于受试部位。如受试样品难以获得，或易产生全身毒性等原因，用量可适当减少。但为了试验的一致性，测试面积应力求相等。 4、试验步骤 1）试验前准备 试验前24h，将实验动物脊柱两侧毛剪去或剃掉，不可损伤表皮，去毛范围左右各3cm×3cm。24h后，选择皮肤健康完整无损的动物进行试验。不应在长有浓密岛状毛的部位进行受试样品试验。 2） 染毒 受试样品0.5ml(g)直接涂布在皮肤上，用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封闭试验，敷用时间为4h。 对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。 对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2 h敷用试验。 试验结束后用温水或无刺激性溶剂清除残留受试物。 如怀疑受试样品可能引起严重刺激或腐蚀作用，可采用分段试验，将三个涂布受试样品的纱布块同时或先后敷贴于一只家兔背部脱毛区皮肤上，分别于涂敷后3min、60min和4h取下一块纱布，皮肤涂敷部位在任一时间点出现腐蚀作用，即可停止试验。 3）观察期限 观察时间的确定应足以观察到可逆和不可逆刺激作用的全过程，一般不超过14d。 于清除受试样品后的1、24、48、72h分别观察给予受试样品部位的皮肤反应，按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，根据24、48和72h各观察时点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强