五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响.docVIP

　　五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响 作者：黄晓敏， 简润好， 余晓铃， 曾穗红， 简笑欢， 黄伟雄， 吴中兴 【摘要】 　　目的研究五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响。方法采用试管对倍稀释法测定五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌的最小抑菌浓度（Ｍｉｎｉｍａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ， ＭＩＣ）。采用平板改良体外复制假单胞铜绿杆菌生物膜模型，并检测五倍子醇提液的不同ＭＩＣ 浓度对假单胞铜绿杆菌生物膜的影响作用。结果五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌的ＭＩＣ 为３１．２５ ｍｇ／ｍｌ，１．５ 倍的ＭＩＣ（４６．８ ｍｇ／ｍｌ）能使生物膜活菌数明显减少，但不能完全清除生物膜上的细菌，２ 倍的ＭＩＣ（６２．５ ｍｇ／ｍｌ）对细菌生物膜有完全清除作用。结论五倍子对铜绿假单胞菌生物膜有清除效应，但还需要进行临床用药研究。 【关键词】 五倍子醇提液 假单胞铜绿杆菌 细菌生物膜 　　Abstract：ObjectiveＴｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ －ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｇ.cｈｉｎｅｎｓｉｓ ｏｎ P．aeruginosa Ｂｉｏｆｉｌｍ ．MethodsＭｉｎｉｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ （ＭＩＣ） ｗas ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｄｏｕｂｌe ｄｉｌｕｔｉｏｎ， ａｎｄ P．aeruginosa bｉｏｆｉｌｍ inating effect ｏｎ ｉｔ．ConclusionＧａｌｌａ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｈａｓ ｔｈｅ eliminating effect ｏｎ P．aeruginosa Ｂｉｏｆｉｌｍ， ｗｈｉｃｈ ｓｔｉｌｌ ｎｅｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ． 　　Key . 　　1.6 五倍子醇提液对铜绿假单胞菌ＢＦ 的影响根据受试菌株的ＭＩＣ 值（３１．２５ ｍｇ／ｍｌ）以及细菌ＢＦ 对抗菌药物的耐受性大于浮游菌的原理［６］ ，用无菌生理盐水将五倍子醇提液分别调整为对受试菌的２ 倍ＭＩＣ（６２．５０ ｍｇ／ｍｌ），１．５ 倍ＭＩＣ （４６．８８ ｍｇ／ｍｌ），１ 倍ＭＩＣ （３１．２５ ｍｇ／ｍｌ），１／２ＭＩＣ （１５．６３ ｍｇ／ｍｌ）系列浓度各２ ｍｌ，并设置不含药物的空白对照，置２５℃水浴预温５ ｍｉｎ。取连续培养７ ｄ 的细菌生物膜的载体，用ＰＢＳ 冲洗未附着细菌，再将其浸入受试药液各浓度试管中，分别于０，４，８，２４ ｈ 将试管置旋涡混合器上以２ ２００ ｒ／ｍｉｎ 震荡混合１０ ｍｉｎ，使载体表面的ＢＦ及ＢＦ 内的细菌脱落到试管内形成菌悬液，再用连续稀释法进行活菌计数，每次测定均重复３ 次 计算 平均值，每个时间段计数３份标本，结果用±s 表示。 　　1.7 统计学处理所有实验数据均用ＳＡＳ 统计分析系统进行处理，数据处理运用t检验、方差分析进行统计。 　　 2 结果 　　2.1 五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌的ＭＩＣ 测定结果五倍子醇提液对铜绿假单胞菌的ＭＩＣ 为３１．２５ ｍｇ／ｍｌ 。见表１。 　　表1 五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌的MIC测定结果（略） 　　2.2 五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌生物膜存活细菌数的影响见表２。当用五倍子醇提液１５．６３ ｍｇ／ｍｌ（１／２ ＭＩＣ），３１．２５（１ＭＩＣ） ｍｇ／ｍｌ 浓度作用生物膜细菌，在４，８，２４ ｈ 时ＢＦ 的活菌数与生理盐水对照组比较，无显著性差异（P＞０．０５）。当继续增加药物浓度至４６．８８ ｍｇ／ｍｌ（１．５ ＭＩＣ）时，在４，８，２４ ｈ 时ＢＦ 的活菌数明显减少，与生理盐水对照组比较，有显著性差异（P＜０．０５），但２４ ｈ 内ＢＦ 中的细菌不能被完全清除。各时间段之间活菌数差异没有显著性（P＞０．０５）。当再继续增加药物浓度至６２．５０ ｍｇ／ｍｌ（２ ＭＩＣ）时，在４，８，２４ ｈ 时ＢＦ 的活菌数无，与生理盐水对照组比较，有极显著性差异（P＜０．０１） ，２４ ｈ 内ＢＦ 中的细菌被完全清除。结果表明４６．８８ ｍｇ／ｍｌ 的五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌ＢＦ 有清除效应，但不能被完全清除ＢＦ 细菌；而６２．５０ｍｇ／ｍｌ 的五倍子醇提液对假单胞铜绿杆菌ＢＦ 有完全清除效应。 　　表2 培养7 d的生物膜载体经五倍子醇提液不同药物浓度作用后的活菌计数（略） 　　与对照组比较，*P＜0.05 　　 3 讨论 　　本研究结果显示，虽然五倍子醇提液对黏液型铜绿假单胞菌浮游菌的ＭＩＣ 值为３１．２５ ｍｇ／ｍｌ （见表１），但１ 倍或１．５ 倍ＭＩＣ的五倍子醇提液不能完全清除生物膜细菌（见表２），其研究结果说明生物膜内细菌比浮游菌的抗药性增加，可能与五倍子有效抑菌成分难于透过以藻酸盐为主要成分的铜绿假单胞菌生物膜有关。