化瘀理肺方对大鼠肺纤维化氧化应激及MMP2-9活性的影响.docVIP

　　化瘀理肺方对大鼠肺纤维化氧化应激及MMP2/9活性的影响 作者：王琴 刘世青 王允山 焦芳芳 李长生 【摘要】 目的 研究化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及其机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组，用1%戊巴比妥钠(35 mg/kg)腹腔内注射麻醉后，经气管内插管注入博莱霉素(5 mg/kg)建立肺纤维化模型，对照组注入生理盐水0.25 ml作为正常对照，从造模后的第2天起分别给予化瘀理肺方药物灌胃（中药组，13 410 mg/kg）、生理盐水灌胃（对照组、模型组）、氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（激素组，25 mg/kg）进行干预，于给药后的14、28 d分别处死。取肺组织进行丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性检测，以及应用凝胶酶谱法检测基质金属蛋白酶2/9（MMP2/9）的活性。结果 中药组肺MDA明显低于模型组和激素组、SOD及GSHPx活性明显高于模型组和激素组；中药组MMP2/9的活性明显低于模型组和激素组（P＜0.05）。结论 化瘀理肺方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠有一定预防性 治疗 作用，可能通过抗氧化和改变MMP2/9的活性而发挥作用。 【关键词】 肺纤维化；化瘀理肺方；氧化应激；MMP2/9 肺纤维化是多种原因引起的慢性肺间质性疾病的共同病理过程，发病机制尚不完全明确。其病理特点包括肺组织间质细胞增殖、细胞外基质（ECM）增生沉积及肺实质的重构，其中氧化应激的增强及ECM代谢失衡在肺纤维化的发生 发展 中具有重要的作用〔1〕。ECM主要由基质金属蛋白酶(MMP)降解。MMP2和MMP9的底物是Ⅳ型胶原，而后者是肺泡壁基底膜的重要成分，肺泡上皮细胞和基底膜的损伤是肺间质纤维化病理过程的关键问题。目前对肺间质纤维化临床上尚无有效的治疗方法，近年来临床报道显示中医辨证与辨病结合组方用药能提高疗效且副作用小。笔者在原有中医药防治肺纤维化理论基础上，进一步探讨化瘀理肺方干预肺纤维化的作用机制。 1 材料与方法 1.1 动物 DA）含量与超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）活性测定 MDA含量测定采用硫代巴比妥酸(TBA)法；SOD活性采用联苯三酚自氧化法；GSHPx活性采用NADPH偶联法。严格按照试剂盒(南京建成生物工程研究所出品)说明书操作。 1.5 肺组织基质金属蛋白酶2/9（MMP2/9）活性检测 采用明胶酶谱法〔3〕，提取肺组织总蛋白；制备SDS明胶聚丙烯酰胺凝胶。取30 μg总蛋白进行还原但非变性电泳。凝胶经脱液、漂洗、孵育后，用考马斯亮蓝染色液予以染色，显示MMP2/9位于蓝色背景上的透明亮带。对条带进行图像分析，测定其灰度值，代表MMP2/9活性。每项实验重复检测5批以上的不同样本。 1.6 统计学处理 采用SPSS13.0软件对实验数据进行统计学处理，数据以x±s表示。同一时间点的4个组进行单因素方差分析，并用q检验进行不同组间的两两比较。 2 结 果 2.1 大鼠肺组织MDA含量的变化 检测结果显示，与对照组比较，模型组大鼠肺组织中MDA含量在14 d即有增高，28 d增高更明显。与模型组和激素组相比，中药组大鼠肺组织中MDA含量显著降低，且在28 d时较14 d明显。见表1。表1 大鼠肺组织各时间点MDA含量的变化与对照组比较：1)P＜0.01；与模型组比较：2)P＜0.05，3)P＜0.01；与激素组比较：4)P＜0.05，下表同 2.2 大鼠肺组织SOD、GSHPx活性的变化 结果显示，与对照组比较，模型组大鼠肺组织中SOD、GSHPx活性显著下降；中药组其活性明显升高，与模型组和激素组相比，中药组大鼠肺组织中SOD、GSHPx活性显著升高，且在28 d时较14 d明显。见表2。表2 各组SOD、GSHPx活性变化 2.3 大鼠肺组织MMP2/9活性的变化 对照组有MMP2的表达，模型组MMP2在14 d时活性较对照组明显升高，且随时间延长活性逐渐降低；中药组与模型组变化趋势相同，14 d达到高峰，此后活性减低，且在14、28 d较模型组、激素组明显降低。与对照组相比，模型组在14 d时大鼠肺组织MMP9在造模后其活性显著升高，此后降低；中药组、激素组与模型组变化趋势相同，中药组MMP9活性在14、28 d时与模型组相比均降低。见图1，表3。 3 讨 论 目前认为氧化/抗氧化失衡在肺纤维化发生 发展 过程中起重要作用。研究显示肺纤维化时,自由基生成增多是目前已知的重要发病机制〔4，5〕。而自由基能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化，并形成脂质过氧化物，如MDA。因此检测MDA的含量可反映机体