双波长薄层扫描法测定乌灵胶囊中多糖的含量.docVIP

　　双波长薄层扫描法测定乌灵胶囊中多糖的含量 【摘要】 　　建立双波长薄层扫描法测定乌灵胶囊中多糖的含量 方法 ： 以无水葡萄糖为对照品，扫描条件为测定波长510mn， 参比波长610mn。 结果：用该方法测定乌灵胶囊中多糖的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。回归方程A=9769．13C -1425.19，r=0.9991，RSD=1.5% ，多糖的含量为不少于27mg/粒 ， 符合药典的含量规定标准。 【关键词】 双波长薄层扫描； 多糖 　　乌灵胶囊［1］由真菌乌灵参经 现代 生物工程技术精制而成，成分为乌灵菌粉，为纯中药制剂。具有补肾健脑、养心安神等功效，广泛被临床 应用 。乌灵菌粉主要成分为多糖。本 研究 采用水提醇沉法提取多糖，针对其含量我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。 　　1 仪器与试剂 　　仪器：CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。 　　试剂：无水葡萄糖对照品（ 中国 药品生物制品检定所）；乌灵胶囊0.33mg/粒批号20050414浙江佐力药业股份有限公司）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；其他试剂均为 分析 纯。 　　2 薄层分析与鉴定 　　2.1 对照品溶液的制备 　　取无水葡萄糖标准品15mg，放入10ml容量瓶中加蒸馏水定容，使对照液的浓度为1.5mg/ml ， 备用。 　　2.2 供试品溶液的制备［2］ 　　将乌灵胶囊倾出 内容 物，精密量取3.3g，加100ml水加热回流2h趁热过滤。高温滤过（不低于80℃）， 取滤液10ml加40ml乙醇冷藏24h，离心（离心条件2000转/min）过滤得沉淀物，沉淀物用水溶解置100ml容量瓶中 ，加水定容，过滤，再精密量取续滤液5ml置50ml量瓶中，加水定容即得。 　　2.3 分离与鉴定［3］ 　　采用20cm×10 cm的玻璃薄层板， 硅胶G与含0.3mmoL/L磷酸二氢钠的0.5%羧甲基纤维素钠液，按1：3比例调匀用薄层涂布器湿法铺板，110℃活化1h。展开剂为正丁醇：乙酸乙酯：异丙醇：乙酸：水：吡啶（7：20：12：7：6：6），显色剂为邻苯二甲酸苯胺,将邻苯二甲酸1.66g 和苯胺0.93g溶于100ml水饱和的正丁醇中。 　　2.4 含量测定 　　扫描条件［3］:反射锯齿扫描，测定波长为510nm，参比波长为610nm，背景校正ON，灵敏度中，狭缝0.4mmⅹ0.4mm，SX=3。 　　标准曲线制备：取无水葡萄糖对照品溶液，以不同点样量（1 ul，2 ul，3 ul，4 ul，5 ul，6ul）点于同一硅胶G板上，相同展开剂展开,展开前饱和30min，取出，晾干后进行扫描，以峰面积积分值为纵坐标，点样量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=9769．13C -1425.19,r=0.9991。无水葡萄糖浓度范围为1.5 ug～9ug时，峰面积值与点样量呈线性关系良好。 　　2.4.1 稳定性实验 取对照品溶液2 ul点于薄层板上，展开，显色，每隔30min扫描一次。结果3h内测定结果稳定，RSD=1.40% ,n=5。 　　2.4.2 样品含量测定 取供试品溶液和对照品溶液各2ul点于同一硅胶G薄层板上，按相同薄层层析条件展开，扫描测定的结果，根据回归方程求得样品中多糖含量为87 mg /g， 相当于28.7mg/粒。 　　2.5 精密度测定 　　取对照品溶液点于同一硅胶薄层板上,每点4.0 ul共点5点,依照薄层层析的条件用相同的展开剂展开,测定多糖斑点的峰面积积分值,得同板的精密度RSD=1.5%，n=5。 　　2.6 回收率测定 　　采用加样回收率测定 方法 ，精密称取同一批号的已知含量乌灵胶囊 内容 物0.66g，共6份，分3组，按供试品溶液的制备项下提取方法操作，分别加入精密量取的对照品溶液1 ml 、1.5 ml 、2 ml混均制成回收液，每份取回收液2ul点板，共6点样，展开，晾干，扫描测定。根据回归方程 计算 回收率，见表1。 　　2.7 多批号样品含量测定 按照测定方法对3个批号的样品进行多糖含量测定，结果见表2。 　　表1 回收率实验测定结果（略） 　　表2 多批量样品含量测定结果（略） 　　3 结论 　　经多批样品中多糖含量的检测，乌灵胶囊中多糖的含量在27 mg/ 粒 以上，符合药典的含量规定标准（多糖含量至少在25mg/ 粒 ）。本方法分离效果好，简便快速，对设备要求不高，能内在的控制乌灵胶囊的质量标准。在实验过程中，对照品配制前必须干燥105℃恒重称量 ，供试品溶液过滤时温度不低于80℃，供试品水溶液应放在冰箱中保存，不