强力霉素对移植肺缺血.docVIP

　　强力霉素对移植肺缺血 【摘要】 目的 探讨外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloprotEinases， MMPs)抑制剂强力霉素在移植肺缺血-再灌注损伤中细胞凋亡的 影响 。 方法 建立大鼠自体左肺肺缺血再灌注模型，16只SD受体大鼠随机分为两组:缺血再灌注组和强力霉素组，用免疫组化方法观察移植肺Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况，并取肺组织平滑肌细胞进行培养，采用荧光技术测定肺组织细胞凋亡。结果 肺缺血再灌注后，与对照组相比，强力霉素组移植肺Bax和Caspase-3表达明显降低(Plt;0.01)， Bcl-2 的表达无明显变化(Pgt;0.05)，但Bcl-2/Bax比例升高；荧光图片显示，强力霉素组的细胞凋亡明显较对照组减少。结论 强力霉素可能通过下调Bax、Caspase-3表达，提高Bcl-2/Bax比例而抑制肺缺血再灌注损伤的细胞凋亡，并通过降低基底膜的降解，减轻肺水肿，达到肺保护作用。 【关键词】 肺；缺血-再灌注损伤；强力霉素 【Abstract】 Objective To investigate the effect of exogenous matrix metalloprotEInase inhibitor on pneumocyte apoptosis in lung ischemia-reperfusion injury and the mechanism. Methods Models of ischemia-reperfusion lung injury in SD rats ly divided into teasured by immunohistochemistry methods after 2h transplantation. Apoptotic morphological changes icroscope. Results The protein level expression of Bax and Caspase-3 ent ia-reperfusion injury. 肺移植作为 治疗 多种终末期肺疾病的有效方法，于1983年在临床上首次获得成功。但越来越多的证据显示，供肺/移植肺仍然易于受到保存损伤(缺血)和再灌注损伤，导致移植后早期严重移植肺功能不全的发生率高达20%，移植受者术后ICU监护时间延长，术后早期死亡率增加［1］，并与移植后晚期较高的闭塞性支气管炎（obliterative bronchitis，OB）发生率相关。因此， 研究 低温肺保存后再灌注损伤的机制，改善移植肺功能，仍然是肺移植领域中所急需解决的重点课题之一。众多研究表明，心肌细胞凋亡是肺缺血再灌注损伤的重要表现形式。细胞凋亡受多种因素的调控，尤其是凋亡调控基因Bcl-2、Bax和凋亡执行基因Caspase-3［2，3］。本研究旨在通过建立大鼠自体左肺肺缺血再灌注模型移植模型，探讨外源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)抑制剂强力霉素在移植肺缺血-再灌注损伤中细胞凋亡的影响。 1 材料与方法 1.1 实验分组、模型建立和取样 1.1.1 实验分组 健康成年雄性Sprague-Dain、冷缺血3h、热缺血30min和不同时间的再灌注处理；B 组（n=8）：治疗组，术前一次性灌胃，连续7天，缺血90min，再灌2h于左肺门开放前10min经颈静脉注入强力霉素30mg/(kg·d)，其余操作同IR组。A组和B组给予等体积的生理盐水。 1.1.2 大鼠自体左肺模拟原位移植模型的建立 术前30min肌注阿托品（0.5mg/kg），30g/L的戊巴比妥钠30mg/kg腹腔内注射，麻醉成功后，将大鼠右侧斜位固定于手术台上。气管切开插管连接微型动物呼吸机。辅助呼吸参数为：潮气量10ml/kg，呼吸频率75次/min，吸入氧浓度FiO21.0，呼气末正压2.0cmH2O。右侧颈动脉插管，用于采集标本、监测血压；右侧颈静脉穿刺备用；尾静脉微量注射泵持续补液，速度为4.0ml/(kg·h)。 经左第5肋间前外侧切口进胸并横断胸骨，打开纵隔。颈静脉注射肝素钠（375.０U/kg）后，剥离左肺门，离断左下肺韧带；经左向右游离右肺动脉、静脉及主支气管，预置阻断带。然后用一塑料袋（内径约2.5cm）套住左全肺，并在肺门处形成反折，连同塑料袋一起用无创伤钳于吸气末阻断左肺门根部［1，2］，此时潮气量减至8.0ml/kg，呼吸频率100次/min，其他参数不变。30min后，在反折的塑料袋加入冷生理盐水及小冰块，把套有塑料袋的左肺上提至切口平面（勿与周围脏器接触）。袋内置一温度计使之保持在4℃左右。冷缺血3h后去除冷