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　　成人不同部位角质形成细胞的生物学特性比较 作者：韩军涛，王洪涛，胡大海，蔡维霞，汤朝武 【摘要】 目的: 观察成人不同部位角质形成细胞的生物学差异，探讨用来构建自体组织工程皮肤的最佳表皮细胞来源. 方法 : 体外分离培养成年男性头皮、躯干、下肢及包皮来源的角质形成细胞，分别利用绘制细胞生长曲线、3H胸腺嘧啶（3HTdR）掺入、流式细胞仪检测等方法比较细胞在生长增殖、细胞周期及代谢等方面的生物学差异. 结果: 在细胞的生长增殖及DNA合成代谢方面，头皮与包皮来源的角质形成细胞之间无统计学差异（Pgt;0.05），躯干与肢体来源的细胞之间亦无统计学差异（Pgt;0.05），但前两者均高于后两者（Plt;0.05）；细胞周期 分析 表明，头皮及包皮来源的角质形成细胞S期比例高于躯干及肢体组. 结论: 头皮及包皮组织来源的角质形成细胞可作为构建自体组织工程皮肤???表皮细胞来源. 【关键词】 角质形成细胞；细胞培养 　　【Abstract】 AIM: To investigate the biological characteristics of keratinocytes derived from different parts of the human skin and discuss an optimal seed for the construction of tissue engineered skin. METHODS: The human keratinocytes the different parts of human male skin such as foreskin, scalp, trunk and limbs (aged 25-35 years). The keratinocytes free culture medium in vitro. The groployed to measure the DNA metabolism. The cell cycle ined etry. RESULTS: For the DNA metabolism and cell proliferation, there e results trunk and limbs groups （Pgt;0.05）. The difference bs （Plt;0.05）. The percentage of cells in S phase of scalp and foreskin groups uch higher than that of trunk and limbs groups. CONCLUSION: It might be better to take the keratinocytes from scalp or foreskin as the seeding cells to construct the tissue engineered skin. 　　【Keya公司；MTT购自华美生物工程公司；550型酶标仪购自美国BioRad公司；流式细胞仪购自美国Becton Dickinson公司；3HTdR购自中科院原子能物理研究所. 头皮、躯干及肢体皮肤标本取自25～35岁男性烧伤患者（烧伤总面积≤30％，其中III度≤10％）；包皮标本取自相同年龄段包皮环切术后. 所有标本均经患者及家属知情同意. 　　1.2方法 　　1.2.1HKC的分组及体外培养细胞按所取部位分为头皮（scalp）、躯干（trunk）、肢体（limbs）及包皮（foreskin）4组. 将所取标本剪成30 mm×5 mm皮条，置于2.5 g/L dispase酶中4℃消化过夜，剥离之表皮以0.01 mmol/L PBS冲洗3遍，再置于2.5 g/L胰蛋白酶与0.2 g/L EDTA混合液(体积比为1∶1)中，37℃消化5 min，终止消化后吹打、过滤、离心，收集细胞，用KSFM培养基重悬后调整细胞浓度为5×108/L，接种六孔板，每孔2 mL，每2～3 d更换培养液1次. 待细胞70%～80%融合时用上述混合消化液消化传代，比例为1∶2. 　　1.2.2观察指标 　　①细胞的生长增殖情况（四唑盐MTT比色法）：取第二代处于对数生长期细胞，同上消化细胞并收集后，以KSFM培养基重悬，调整细胞浓度为5×107/L，接种96孔板，每孔100 μL，每组2个复孔，37.0℃，50 mL/L CO2孵箱中孵育2 h后加入KSFM培养基300 μL/孔，继续培养24 h后将第一组细胞每孔加入20 mL MTT（20 g/L），孵育4 h后弃上清，每孔加入0.5 mL二甲基亚砜，振荡30 min后选择490 nm波