多重实时荧光定量PCR对9种常见呼吸道病原体检测.pdf

1160 I~eled Immunoassays Clin Med , No肌 2015.Vo I. 22 ， No.ll 多重实时荧光定量 PCR 对 9 种 常见呼吸道病原体检测 王玉月，史伟峰，李云 (苏州大学附属第三医院检验科，江苏常州 213 (03) 摘要:目的 探讨多重实时荧光定量 PCR( MRT-PCR) 检测 9 种常见呼吸道病原体的临床应用价值。方法 采用 Primer Express3. 0 ( ABI) 和 Primer3 Input 4.0 设计引物和探针建立 MRT-PCR 法，通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限 和特异性。并对 204 例临床标本中副流感病毒 1 ， 2 ， 3 型、肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病 毒、乙型流感病毒进行回顾性检测。结果 MRT-PCR 法检测病原体的最低检出限达 10 3 copies/ mL ，特异性达 1 ∞%，无交 叉反应。 204 例咽拭子标本中， MRT-PCR 检出呼吸道合胞病毒 23 例，副流感病毒 1 、 2 、 3 型 13 例，腺病毒 15 例，肺炎支原 体 15 例，肺炎衣原体 3 例，甲型流感病毒 13 例与乙型流感病毒 6 例。该结果与其他试剂报告结果完全一致。结论 多重 实时荧光定量 PCR 具有快速、准确、特异性强等特点，在呼吸道病原体检测方面有重要价值。 关键词:多重实时荧光定量 PCR; 间接免疫荧光法; 呼吸道病原体 The Multiple Real- time Quantitative PCR Assay for the Detection of Nine Common Respiratory Pathogens WANG Yu-yue ,SHI Wei-feng ,JI Yun (Departmart of Laboratory Medicine , The Third Affiliated Hospital , School of Medicine , Suzhou Universi 町， Changzhou 213003 , China) Abstract: Objective To explore the clinical significance of nine common respiratory pathogens detected by multiple real-time quantitative PCR (MRT-PCR) assay. Metbod.s The primers and probes for respirat。可 vlruses were designed with Primer Express 3.0 (ABI) and Primer3 Input 4. O. 四le lowest detectable limit and specificity of MRT - PCR were analyzed by plasmid standard constructing. Parainfluenza type 1 , 2 , 3 , mycoplasma , chlamydia , respiratory syncytial virus , adenovirus , influenza virus A and B in 204 throat swabs were retrospectivel