硬膜外间隙充填60 g-L羟乙基淀粉对大鼠脊髓和脊神经根的影响.docVIP

　　硬膜外间隙充填60 g/L羟乙基淀粉对大鼠脊髓和脊神经根的影响 【摘要】 目的： 观察硬膜外间隙充填60 g/L羟乙基淀粉对大鼠脊髓和脊神经根的 影响 . 方法 ： 硬膜外置管成功后的成年雄性SD大鼠24只，随机分成4组，每组6只. 除Ⅰ组不注入任何药物外，Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组分别通过硬膜外导管注入生理盐水、60 g/L羟乙基淀粉、400 mL/L乙醇0.2 mL，1次/d，连续3 d. 测定体质量，夹趾试验和运动缺陷，1次/d，连续3 L对大鼠脊髓和脊神经根无明显影响. 【关键词】 羟乙基淀粉 注射 硬膜外 脊髓 脊神经根 0引言 硬膜外自体血充填是 治疗 硬膜穿破后头痛（PDPHA）的经典方法，但是 目前 自体血充填的安全性受到了质疑，因为它可以导致一些严重的并发症，如蛛网膜下腔出血［1］. 生理盐水、羟乙基淀粉以及右旋糖酐作为自体血的替代品已经用于硬膜外充填，然而关于它们对脊髓和脊神经根有无影响尚无定论. 我们拟观察硬膜外间隙充填60 g/L羟乙基淀粉对脊髓和脊神经根的影响，探讨其作为硬膜外充填物的安全性. 1材料和方法 1.1材料成年雄性SD大鼠，体质量250～300 g，由华中 科技 大学同济医学院实验动物中心提供. 硬膜外置管成功后的大鼠24只，测体质量并随机分成Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组，每组6只. 除Ⅰ组不注入任何药物外，Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ组分别通过导管注入生理盐水（Ⅱ组），60 g/L羟乙基淀粉（Ⅲ组），400 mL/L乙醇（Ⅳ组）0.2 mL，1次/d，连续3 d. 60 g/L羟乙基淀粉（羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液）为德国费森尤斯卡比公司产品. 1.2方法腹腔注射100 g/L水合氯醛300 mg/kg麻醉后背部除毛，用750 g/L乙醇消毒，操作过程中用60 mL注射器横垫在腹部使腰椎充分弯曲. 沿中线于T13 L1棘突间切开皮肤，打开筋膜，切开T13与L1的棘间韧带并分离棘突两侧肌肉，暴露T13与L1棘突间隙. 仔细分离此间隙上下的筋膜和肌肉组织，小心地分离出椎板间孔. 剪掉T13棘突，用止血钳夹住L1棘突并往上提，经椎板间孔插入自制的硬膜外导管，沿脊柱方向轻柔地向尾端置入2 cm，固定导管，青霉素钠粉涂抹，缝合肌肉，并作皮下隧道将导管另一端引出于颈背部，外露1.5 cm固定. 待大鼠麻醉完全清醒后通过导管缓慢注入20 g/L利多卡因0.1 mL，如果大鼠后肢瘫痪而前肢运动正常则说明导管位于硬膜外间隙；若大鼠出现呼吸困难，死亡或后肢未瘫痪则说明导管位置异常，此大鼠被舍弃. 连续3 d观察大鼠步态、脊柱外形和感觉运动功能，若大鼠出现以上任何一方面的异常，则舍之不用. 置管后第4日通过硬膜外导管给药，除Ⅰ组不注入任何药物外，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组分别注入生理盐水、60 g/L羟乙基淀粉、400 mL/L乙醇0.2 mL，1次/d，连续3 d. 给药完毕后再次测试导管位置，测试后拔除导管. 1.2.1观察指标大鼠的体质量增加值；饮食及活动能力，夹趾试验和运动缺陷［2］；脊髓和脊神经根的光镜电镜结果. 1.2.2取材及病 理学 观察3 g/kg腹腔注射麻醉，开胸从左心室插管至升主动脉，先用生理盐水灌注，待大鼠肝脏变白后用30 g/L多聚甲醛，20 g/L戊二醛磷酸固定液灌注、处死. 以L3脊神经根为中心完整取下L1棘突水平以下的脊髓和脊神经根. 每组取5只标本放在40 g/L多聚甲醛磷酸缓冲液中固定48 h后，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察脊髓和脊神经根形态学变化. 另1只标本放在25 g/L戊二醛磷酸缓冲液中固定后行透射电镜观察脊髓和脊神经根超微结构的变化. 统计学处理：采用SPSS13.0统计软件包对数据进行 分析 . 计量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析；计数资料采用Fisher精确概率法，多重比较采用LSDt检验. Plt;0.05表示差异有统计学意义. 2结果 2.1体质量增加值四组间大鼠最初体质量的差异无统计学意义（Pgt;0.05）. 注药后3 . 图1光镜下的病 理学 结果 电镜下：Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组脊髓后角神经元细胞膜完整, 细胞核大，核仁明显，粗面内质网成堆、线粒体、高尔基体、溶酶体等细胞器均清晰可见(图2A)；脊髓神经纤维轴索排列成束，轴索内线粒体双层囊膜与板层排列的嵴均清晰可见，轴突内微丝排列密集，走形规则(图2B)；脊神经根髓鞘均发育良好，密度均等，轴突内微丝排列密集，走形规则，线粒体丰富，嵴清晰(图2C). Ⅳ组脊髓后角运动神经元细胞膜完整, 细胞核大，核仁明显，高尔基体扩张，其余细胞器清晰无明显异常(图2D)；部分脊髓神经纤维排列紊乱，髓鞘分离，轴索无明显病理改变(图2E)；脊神经根髓鞘大多数明显水肿，髓鞘分离，轴索无明显病理改变(图2F). A: Ⅲ组大鼠脊髓