血管内皮细胞生长因子对骨缺损修复的影响.docVIP

　　血管内皮细胞生长因子对骨缺损修复的影响 【摘要】 探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）对肌肉骨膜瓣、松质骨颗粒和骨髓联合移植修复骨缺损中的 影响 .［ 方法 ］制作家兔桡骨骨缺损模型，在缺损区用肌肉骨膜瓣、松质骨颗粒及骨髓进行联合移植，于术后第1、2、4、6、8周时利用光学显微镜和免疫组织化学等方法检测VEGF在骨缺损修复不同阶段中对各种细胞内的表达情况.［结果］VEGF在骨缺损修复过程中的不同阶段的表达程度不同，在术后1～6周时(即软骨内化骨阶段)，新生的骨细胞、成骨细胞及软骨细胞内均可见大量的VEGF，其高峰出现在第4周.［结论］VEGF是骨缺损修复过程中重要的生长因子，联合移植有利于骨缺损的快速修复. 【关键词】 血管内皮生长因子类 骨缺损 骨移植 Effects of vascular endothelial grousculoperiosteal flap, bone marroental bone defect id upper of radial shaft of adult rabbits, and bination of musculoperiosteal flap, bone marromunohistochemistry at postoperative of 1, 2, 4, 6, 8 one to six akes for repairing the bone defect. Key m，制作骨缺损动物模型，选择右前肢为实验肢，左前肢为对照肢.取髂后上棘切口，长度约为20mm，取出15mm×10mm大小的髂骨，刮取其松质骨颗粒备用；于胫骨上段前内侧切开皮肤约10mm,抽取骨髓2.0mL, 自然 状态下凝固备用.将实验组旋前圆肌置入骨缺损模型家兔实验肢骨缺损区，并将松质骨颗粒及骨髓植入旋前圆肌组织内，用桡骨骨膜包裹，用50无损伤线仔细缝合骨膜，再逐层缝合切口；而对照肢则未给予任何处理，直接缝合.分别于术后1、2、4、6、8周时随机选择模型家兔5只处死，分别于实验肢及对照肢桡骨骨缺损处取材，置于100g/L甲醛溶液固定24h，EDTA脱钙4周，每周换液1次，梯度酒精脱水，石蜡包埋，5μm厚组织切片，行HE及免疫组织化学染色.方法为组织切片脱腊，水化，EDTA热修复，过氧化氢封闭非特异性抗原，PBS冲洗3次，滴加第一抗体，4℃过夜；冲洗3次，滴加第二抗体，室温孵育10min；PBS冲洗3次，滴加辣根酶标记链霉卵白素，室温孵育10min；PBS冲洗3次，DAB显色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片. 2 结果 2.1 HE染色表现 术后第1周对照肢炎性细胞减少，有少量纤维组织形成；第2～4周，缺损组织中纤维组织大量形成，但排列紊乱，伴有少量软骨细胞增生；第4～6周，缺损组织中纤维组织排列整齐，可见软骨细胞及少量类骨样组织，呈软骨内化骨；第8周，缺损组织中可见软骨细胞，仅在骨折端可见骨痂形成，中间仍有纤维结缔组织.术后第1周实验肢缺损组织中可见大量的间充质细胞形成；第2周，可见大量间充质细胞向软骨细胞分化，同时有大量软骨细胞团形成；第4周，可见大量软骨细胞与条索状的新生骨细胞，仍有大量增殖的间充质细胞；第6～8周，缺损组织中软骨内化骨已形成完整的骨组织. 2.2 VEGF的 影响 术后第1周对照肢取材组织的炎性细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞内可见大量的VEGF；第2～4周，在骨折端成纤维细胞、血管内皮细胞及软骨细胞内可见大量的VEGF(图1A)；第4～6周，在血管内皮细胞及软骨细胞内可见少量的VEGF；第8周，在取材组织中未见VEGF.术后第1、2周时实验肢成纤维细胞、血管内皮细胞及软骨细胞内可见大量VEGF；第2～4周，骨折端组织血管内皮细胞及软骨细胞内仍可见较多VEGF(图1B)；术后第6周，大量的软骨细胞内仍可见VEGF；术后第8周，在骨细胞中未见VEGF. 3 讨论 目前 ，骨折后缺损骨修复的确切机制尚未十分清楚，而骨不连的预防与 治疗 亦是骨科难题.骨折修复是由多种因素参与的复杂的生物学过程，而与成骨有关的血管形成和成骨细胞活性的保持有赖于成骨因子的刺激素［1］.VEGF糖蛋白，分子质量为34～45ku，可由多种哺乳类动物及人类的胚胎和成年组织中产生，可通过旁分泌强烈地刺激体内新生血管的生成，增加血管通透性，对维持血管的正常状态和完整性具有重要意义［2，3］.VEGF是目前已知的众多血管生长因子中作用最强［4］，其他促血管生成因子的作用均直接或间接地通过增强VEGF表达来实现.本实验用肌肉骨膜瓣、松质骨颗粒和骨髓联合移植修复长段骨缺损，并用HE、免疫组织化学染色和原位杂交的 方法 观察了骨缺损的修复时间与VEGF在细胞内表记情况.实验结果表明，在早