【2017年整理】细胞培养技术.ppt

传代细胞培养结果 一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2～4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.   细胞的冻存、复苏与运输 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一、培养物的冷冻保存与复苏原理 冷冻保存(cryopreservation)：将体外培养物悬浮在加有冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度(一般是低于-70℃的超低温条件)，并在此温度下对其长期保存的过程。 复苏(thawing)：是以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 细胞冻存时，存在两种损伤：冰晶损伤 　　　　　　　　　　　　　　溶质损伤 　冰晶损伤：因细胞内、外结冰而致的细胞损伤被称为细胞的冰晶损伤。 冰晶损伤是由冷却速度过快造成，冷却速度越快，冰晶损伤越大。 溶质损伤：因保存溶液溶质浓度增高而致的细胞损伤被称为溶质损伤。 　 溶质损伤是由冷却速度过慢，使细胞在高浓度的溶液中暴露的时间过长而造成，冷却速度越慢，此损伤越严重  　 　　　　　　　　　　　 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 影响冷冻效果的因素有以下几点： 　1.冷冻速率 　不同的冷冻速度既然能使细胞内发生不同的生理变化，也可以对细胞产生不同的损伤。当冷冻速度过慢时，细胞脱水严重，细胞体积严重收缩，超过一定程度时即失去活性。冷冻速度过慢，还会引起细胞外溶液部分结冰，从而使细胞外未结冰的溶液中溶质浓度增高，产生溶质损伤。 　当冷冻速度过快时，细胞内水分来不及外渗，会形成较大冰晶,造成细胞膜及细胞器的破坏，产生细胞内冰晶损伤。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2.冷冻保存温度： 液氮温度(-196℃)是目前最佳冷冻保存温度。 应用-70℃～-80℃条件冷冻保存细胞，短期内对细胞活性无明显影响，但随着冻存时间延长，细胞存活率明显下降。 不同细胞的最适冷冻速率不同。例如，小鼠骨髓干细胞、酵母、人红细胞的最适冷冻速率分别为1.6℃/min、7℃/min和200℃/min。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3.复温速率 复温速率是指在细胞复苏时温度升高的速度。 一般来说复温速度越快越好。常规的做法是，在37℃水浴中，于1～2min内完成复温。 　在冷冻复苏中遵循：慢冻速溶原则！ Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 4.冷冻保护剂：是指可以保护细胞免受冷冻损伤 的物质。 分为：渗透性： 常用甘油、DMSO 　　　 非渗透性:乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白及羟乙基淀粉等。 甘油或二甲基亚砜这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyri