急性白血病M4Eo型患者ETV6基因重排及其意义.docVIP

　　急性白血病M4Eo型患者ETV6基因重排及其意义 【摘要】 目的 探讨在急性髓细胞白血病（AML）M4Eo型患者中检测到ETV6基因重排的临床意义。 方法 对3例AMLM4Eo患者骨髓标本进行细胞培养，制备染色体， 分析 核型，Splitsignal FISH技术分析12p13染色体易位，RTPCR检测ETV6/ARG融合基因产物。结果 核型分析显示3例患者均有inv(16)，Splitsignal FISH检出12p13染色体易位1例，RTPCR证实患者ETV6/ARG融合基因产物阳性。这是国际上第2例报道ETV6/ARG融合基因在AMLM4Eo中表达。结论 伴有ETV6/ARG融合基因的患者对化疗不敏感，预后较ETV6/ARG融合基因阴性者差。Splitsignal FISH是检测ETV6基因重排准确可靠的手段。 【关键词】 白血病；ETV6；原位杂交；聚合酶链反应 　　To explore the clinical significance of ETV6 gene rearrangement involved in acute myelogenous leukemia M4Eo. Methods 3 cases of AML M4Eo chromosomes after bone marroined by Splitsignal FISH in interphase and metaphase cells. ETV6/ARG fusion genes osomal abnormalities al fluorescence signal ical therapy, and even has a easure to detect ETV6 gene rearrangement. 　　Key ia; ETV6; In situ hybridization; RTPCR 　　急性髓细胞白血病（acute myelogenous leukemia，AML）分多种类型，常伴有特异的染色体异常。急性髓细胞白血病M4Eo型是一类少见的伴有异常嗜酸性粒细胞增多的恶性克隆性造血系统疾病,inv(16)是其常见的染色体异常。ETV6基因在多种造血系统恶性疾病中均检测到,可与多种伙伴基因相融合,对疾病的发生、 发展 、预后有极其重要的意义［12］。为 研究 AMLM4Eo患者ETV6基因重排及意义,本研究 应用 Splitsignal FISH技术对3例确诊为AMLM4Eo的患者染色体标本进行检测分析，发现1例M4Eo患者存在12p13与1q25的易位,经RTPCR证实易位形成的融合基因为ETV6/ARG,这是继Cazzaniga.G等［3］4370在M4Eo病人中首次报道ETV6/ARG融合基因后发现的第2例该融合基因阳性的M4Eo病人。 　　1 资料与方法 　　1.1 病例资料 　　3例AMLM4Eo患者均为初治病例，临床诊断根据患者的临床表现、骨髓细胞形态学、骨髓细胞化学染色、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检查结果并参照2001年LM4Eo患者染色体标本进行荧光原位杂交检测其ETV6重排情况。荧光原位杂交试剂盒、Human CotI DNA、链霉亲和素HRP工作液、DAPI均购自美国Invitrogen公司,缺口平移法标记探针DigNick Translation Mix试剂盒、BiotinNick Translation Mix试剂盒、抗DigAP、HNPP/Fast Red TR均为Roche公司产品,质粒DNA提取试剂盒为QIAGEN公司产品,去离子甲酰胺为AMRESCO公司产品,严格按操作说明书进行操作。 　　1.3.1 探针 　　选取位于ETV6基因两侧的基因序列(BAC)作为探针。选取的两个人工合成的细菌BAC序列均购自Invitrogen公司,将含BAC序列(RP11434C1和RP11525I3)的大肠杆菌进行扩增,用质粒DNA提取试剂盒提取目的DNA,即为探针DNA,分别用DigNick Translation Mix、BiotinNick Translation Mix标记，然后用Quick Spin Columns(Roche公司产品)纯化,最终得到纯化后的探针分别为DIG525I3和Bio407P10。探针变性液包括去离子甲酰胺、氯化钠/柠檬酸钠混合液(SSC液)、去离子水、浓盐酸。 　　1.3.2 步骤 　　染色体标本从-20?℃的冰箱中取出后,滴片,晾干,经2×SSC,脱水，RNase A, 蛋白酶K处理,72?℃玻片变性,探针在76?℃变性液中变性5?min，置冰上5?min后于37?℃预杂交1?h，将探针滴加在玻片上,石蜡封片,37?