滤膜过滤法(MF过滤法).doc

濾膜過濾法(MF過濾法) 目的：學習如何使用濾膜法檢驗水樣中的大腸菌類的菌類數，用培養基 培養大腸菌類，利用大腸菌類所形成的綠色金屬光澤進行計數。 原理：將水樣經由抽氣幫浦真空抽氣，通過無菌濾膜，大腸菌類因此無法 通過濾膜，置留在濾膜上，接著放入M-Endo agar培養基中，放入 37℃恆溫培養箱中，培養24小時。培養過程中，大腸菌類會分解乳 糖，產生氣體和醛類，醛類會和培養基中的鹼性洋紅染料結合，產 生在陽光反射下出現的綠色金屬光澤，依據這個來計算大腸菌類的 數目。 過程方法： 取一錐形瓶放入1.53g M-Endo加上100ml二段水加上0.6ml酒精，再放 上電磁加熱攪拌器，加熱至煮沸。過一下子，稍微冷卻後，用隔熱手 套把培養液分裝成6個培養基，放置凝固冷卻。 3. 利用隔壁實驗室的抽氣幫浦真空抽氣過濾，總共做6個10～10--5的無 菌濾膜，過濾完之後，放上培養皿中，再放入37℃恆溫培養箱中，等 24小時候，進行觀察。 材料：1.器材：三角錐瓶、塑膠培養皿、無菌濾膜、鑷子、塑膠滴管、定量 玻璃吸管、吸球、量筒、隔熱手套、稱藥杓、稱藥紙。 2.儀器：37℃恆溫培養箱、電磁加熱攪拌器、電子分析天平、過濾抽 氣裝置。 結果： 所選取之大腸桿菌群菌數落＊100　　 1＊100 大腸桿菌密度(CFU/100ml)＝────────────────＝───── 所有選曲之過濾水樣之體積(ml) 100 ＝1(CFU/100ml 10 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 -問題- 比較同一樣品以濾膜法、多管醱酵法二種實驗方法所記錄整理出來的數據，並參四法規(參考附錄四)所定之標準，是否樣品超過標準及受到大桿腸菌之污染？請進行合理的解釋和討論。 Ans：兩次實驗用的樣品不同，所以無法評斷。 請試述濾膜法與多管醱酵法之間之異同及優缺點。 Ans： 都是用來測定大腸菌類的數目。 實驗時間 培養機配置 使用經費 使用水樣 多管發酵 四天 複雜 多 較少 濾膜法 短時間 簡單 少 較多 試述多管醱酵法與濾膜法中所使用的LST、BGLB、EMB培養皿、M-Endo培養基(液)之特性，並說明其主要用途為何？ Ans： 特性 用途 LST 水樣中如果有大腸菌類會以LST培養基裡面的乳糖作為碳源產生氣體，為陽性反應。其他無法利用者，則是受到抑制，無法生長。LST培養基中含有膽鹽作為表面張力的抑制劑，可以抑制大腸菌類以外的菌種生長。 工業廢水、市鎮廢水、污水處理場放流水、以污染嚴重之水樣、處理厰各操作單元之水樣。 BGLB 是一種選擇性的培養基，成分除了含有乳糖之外，添加煌綠和膽汁可抑制革蘭氏陽性(G+)及生成胞子的微生物生長，以BGLB培養基培養將可以使大腸菌類大量增殖。 過去紀錄顯示推定試驗不合要求之水樣、例行檢驗飲用水、水廠配水、各處理階段之水樣、污水廠中加氯消毒處理之待放流水、浴用水。 EMB 培養皿 可抑制革蘭氏陽性菌生長，並於酸性環境中沉澱於大腸菌菌落上，形成墨綠色金屬光澤，用此一特殊的生理特性來鑑別大腸菌類，再利用革蘭氏染色進行染色、LST培養基確認是否產氣。 原水或配水之水質控制、決定給水是否合乎安全。 M-Endo培養基 大腸菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會和培養基中的鹼性洋紅染料結合，產生在陽光反射下出現的綠色金屬光澤，依據這個來計算大腸菌類的數目。 實驗中來判定是否有大腸菌類。 試問濾膜之操作流程？其實驗結果如何決定待測水樣中是否有大腸菌類？ Ans：一. 取一錐形瓶放入1.53g M-Endo加上100ml二段水加上0.6ml酒精，再放 上電磁加熱攪拌器，加熱至煮沸。過一下子，稍微冷卻後，用隔熱手 套把培養液分裝成6個培養基，放置凝固冷卻。 3. 利用隔壁實驗室的抽氣幫浦真空抽氣過濾，總共做6個10-1～10-3的無 菌濾膜，過濾完之後，放上培養皿中，再放入37℃恆溫培養箱中，等 24小時候，進行觀察。 二. 大腸菌類會分解乳糖，產生氣體和醛類，醛類會和培養基中