正交实验优化蛹虫草培养成分提高虫草菌素含量.docVIP

　　正交实验优化蛹虫草培养成分提高虫草菌素含量 作者：施渺筱，舒星，肖洋，蒋滔　李祝 【摘要】 目的通过正交实验优化蛹虫草培养成分，提高虫草菌素含量。方法以蛹虫草的无性型Peacilomyces militaris 08-03为材料，进行正交实验。结果通过正交实验优选出的最佳培养基成分为：蛋白胨2%、酵母膏3%、麦牙糖3%、蔗糖4%、KH2PO4 0.1%、NaNO3 0.1%、NH4Cl 0.2%,140 r/min，27℃，摇瓶发酵8 d;虫草菌素含量为(0.98±0.08) mg/g。结论优化的培养基比用查氏液体培养基培养的虫草菌素产量[(6.51±0.22) mg/g]提高了近6.6倍。 【关键词】 虫草菌素; 蛹虫草; 培养基; 发酵 　　Abstract：ObjectiveTo optimize the media conditions of Cordyceps militaris by orthogonal layout to enhance cordycepin production.MethodsThe study um media conditions for submerged fermetation of Peacilomyces militaris 08-03 to enhance cordycepin content.ResultsThe optimum conditions altose,4% cane sugar,0.1% KH2PO4,0.1% NaNO3 and 0.2% NH4Cl,140 r/min,27℃,fermentation for 8 days,the cordycepin production from Peacilomyces militaris 08-03 mycelia g/g.ConclusionThe cordycepin production in the optimum media es more than the Czaped(0.98±0.08 mg/g). 　　Key ilitaris; Cordycepin; Cultural Media; Increasing 　　虫草菌素(Cordycepin)即3-脱氧腺苷(3-Deoxyadenosine)，又称蛹虫草菌素，由Cunningham等于1951年从蛹虫草Cordyceps militaris(Linn)Link的培养滤液中分离得到。蛹虫草菌素是第1个从真菌中分离出来的核苷类抗生素[1，2]。 　　虫草菌素具有多种生物学活性。虫草菌素能抑制枯草杆菌、链球菌、鼻疽杆菌、炭疽杆菌、猪出血性败血症杆菌及葡萄球菌等病原菌的生长，对石膏样小芽孢癣菌、羊毛状小芽孢癣菌及须疮癣菌等皮肤致病性真菌亦有抑制作用。虫草菌素对鼠艾氏腹水癌、人鼻咽癌KB细胞、人表皮样疣和人宫颈癌Hela细胞等皆具有明显的拮抗抑制作用。虫草菌素可抑制一种脑炎病毒，对人体免疫缺陷病毒HIV I型的侵染及其反转录酶的活性亦有抑制作用。另外，虫草菌素对尖音库蚊Culex pipiens、埃及伊蚊Aedes aegypti和另一种伊蚊A.atropalpus的幼虫也有明显致死作用[2～5]。虫草菌素的多种生物学活性引起了药学界的重视，但野生的蛹虫草中虫草菌素的含量一般不高[6，7]。因此，提高发酵菌丝体中虫草菌素的含量成为研究热点。 　 　1 材料和方法 　　1.1 供试菌株蛹虫草Cordyceps militari无性型，蛹草拟青霉Paecilomyces millitaris 08-03菌株(以下简称08-03)，保存于安顺学院化学系。 　　1.2 试剂虫草菌素(cordycepin)购于美国Sigma公司。其他试剂均为分析纯。 　　1.3 08-03菌丝体中虫草菌素含量的测定[8]精密称取08-03菌丝干粉0.2 g，置于25 ml具塞试管中，加入6倍量的20%乙醇，50℃水浴30 min，稀释并定容至25 ml，双层滤纸过滤，用HPLC进行测定。 　　色谱柱：C18 (4.6 mm × 250 mm，5 μm);流动相：0.02 mol/L乙酸铵∶甲醇(85∶15);流速0.7 ml/L;紫外检测波长260 nm;在此条件下，虫草菌素保留时间为6.66 min。 　　1.4 碳源的选择以蛋白胨2%，MgSO4·7H2O 0.05%，KH2PO4 0.1%为基础培养基，以葡萄糖、蔗糖、甘油、麦芽糖、可溶性淀粉分别为5种碳源加入，制备培养基，培养基装量为20%(所有实验均用此)，将08-03接入不同的培养基中，140 r/min，27℃，摇瓶培养192h(8 d)，对比葡萄糖、蔗糖、甘油、麦芽糖、可溶性淀粉分别为碳源时对虫草菌素