遗传学-2010-17-基因治疗课件.pptVIP

第十一章 基因治疗（Gene Therapy） 第十一章 基因治疗 基因治疗（Gene therapy?） ：指应用DNA重组技术，将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,以达到治疗的目的。 一、基因治疗策略 1、直接基因治疗：纠正突变基因 在原位修复缺陷的基因，以达到治疗目的。为较理想的基因治疗策略，由于存在某些问题，目前正在努力之中。（未实现） 2、间接疗法：以正常的基因替代致病基因。 导入外源正常基因，没有去除或修复有缺陷的基因。用DNA重组技术设法修复患者细胞中有缺陷的基因，使细胞恢复正常功能而达到治疗遗传病的目的。 二、基因治疗的途径： 1、生殖细胞基因治疗：将正常基因转移到患者生殖细胞（精细胞，卵细胞，早期胚胎）使其发育成正常个体。为理想的治疗方法，从根本上治疗遗传病，使其有害基因不能在人群中散播。 2、体细胞基因治疗：将正常基因转移到体细胞，使之表达基因产物，以达到治疗的目的。但有害基因能遗传给后代。 三、基因治疗的方法： 1. 目的基因的获得 人工合成 逆转录 基因组DNA 逆转录病毒载体优点： ①高效感染宿主细胞，转染率可达100% ②病毒基因和所载的外源基因都可能表达 ③宿主范围广，可同时感染大量细胞并长期存留 缺点 ①病毒基因容量有限，一般只能插入7kb左右片段； ②随机插入靶细胞基因组中，使插入点附近的基因过度表达或失活，插入的外源基因可能不适当的表达；有致癌作用，可能使受体细胞癌变。 受体载体转移法：将含有目的基因的重组质粒和某些细胞表面受体能识别的特异性多肽（配体）形成复合物，通过细胞内吞途径达到转移基因的目的。 同源重组技术（homologus recombination）:外源基因和染色体上的基因在同源序列间发生重组而插入染色体。 同源重组成果细胞的筛选： 启动子缺失筛选法Poly-A缺失筛选法正负筛选策略（positive and negative election，PNS） 四、靶细胞的选择 靶细胞是指接受外源Gene的体细胞 选择靶细胞的原则是： 1）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术操作； 2）易于由人体分离又便于输回体内 3）具有增殖优势，生命周期长（能存活几月至几年，或整个生命周期） 4）易于受外源遗传物质转化。 常见的靶细胞 外周血T淋巴细胞 上皮细胞 内皮 皮肤成纤维细胞 造血干细胞——β地中海贫血、严重复合免疫缺陷病等 肝C——家族性高胆固醇血症、低密度脂蛋白病的基因治疗 肌细胞 基因治疗的原则 选择适当的疾病，清楚疾病的发病机理，Gene的结构和功能。 被纠正的基因已克隆，并清楚Gene表达与调控机制与条件。 选择适当的受体细胞并在体外有效表达。 安全有效的基因转移方法，以及供利用的动物模型。 基因治疗的应用 复合免疫缺陷综合征的基因治疗（人类Gene治疗成功例子） ADA缺乏症——致死性疾病，患者由于腺苷酸脱氨酶（ADA）缺乏。 基因治疗的应用 乙型血友病（1991年我国基因治疗成功的例子，薛京伦） XR ，患者凝血因子Ⅸ缺乏，Ⅸ因子基因定位在Xq26.3-q27.2。 逆转录病毒载体 + FⅨ-cDNA 重组体 5` LTR FⅨ neo SV PSO LTR 3` 基因治疗的应用 黑色素瘤的基因治疗 肿瘤浸润淋巴细胞——TIL，它积聚肿瘤部位，并在该处持续存在而无副作用，利用此特点协助治疗肿瘤。 基因治疗的应用 自杀基因的基因治疗 基因治疗的应用 反义核酸基因治疗 肿瘤特异性基因治疗从单靶点打击到多靶点网络打击 黄 辰 西安交通大学医学院 环境与疾病相关基因教育部重点实验室 基因治疗存在的问题与论理学 1.导入基因的持续性和高效表达 2.Gene治疗与社会伦理道德（生殖细胞基因治疗）