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三妙丸中牛膝引药作用的机理研究.doc
三妙丸中牛膝引药作用的机理研究
作者:孙备 吕凌 陆忠祥 杨士友
【摘要】 目的通过药代动力学组织分布研究法,研究牛膝在正常大鼠体内对三妙丸中主要有效成分小檗碱组织分布的影响,以探讨其引药的作用。方法大鼠均分成两组,分别灌胃给予含或不含牛膝的三妙丸水提物,给药后2 h,4 h,6 h和7 d处死动物,取血浆和心脏、后肢关节组织的匀浆,用高效液相色谱(HPLC)法测定组织中小檗碱的浓度。结果含牛膝三妙丸组动物给药后关节药物浓度在2 h时与去牛膝三妙丸组相近,4 h明显高于去牛膝组,6 h与去牛膝组相近,多次给药后明显高于去牛膝组。含牛膝组的关节/心脏药物浓度比始终明显大于去牛膝组。结论牛膝有促进三妙丸中有效成分小檗碱向关节组织分布的作用。
【关键词】 牛膝 三妙丸 小檗碱 组织分布
Abstract:ObjectiveTo study the effect of Achyranthes bidentata Bl. in Sanmiao pills on Berberines tissue distribution in normal rats. MethodsThe rats iao pill als openate of heart, arthrosis and blood e in the rats e.ConclusionAchyranthes bidentata Bl. has enhancing effect on berberines arthrosis distribution.
Key iao pills; Berberine; Tissue distribution
三妙丸是从古代的二妙散演变而来的,方中苍术燥湿健脾,黄柏清热燥湿,牛膝引药下行,故治湿热下注等症。中医典籍中记载,牛膝除了具有化瘀通络、补肝强肾功效外,还有“引药下行”的作用,因此多用于 治疗 下肢疾患。如《寒温条辨》记载:“牛膝,生用其性下走如奔,破血症,通经闭,引诸药下行。”《本经逢原》亦云:“丹溪言牛膝能引诸药下行,筋骨痛风在下者宜之。”
牛膝“引药下行”的作用虽然被诸多医书所记载,但其作用机理尚不明确,有研究认为其“引药下行”作用可能是与苍术、黄柏的药效协同作用[1],但是否与 现代 医学中认为的促进有效成分向病灶部位分布有关尚待研究。本文采用药物组织分布的研究方法,观察牛膝对三妙丸中有效成分小檗碱在大鼠口服后组织分布的影响,以探索牛膝在三妙丸中“引药”的作用机理。
1 材料与仪器
1.1 药材 黄柏Phellodendron chinense SchnEid.产地四川,牛膝Achyranthes bidentata Bl. 产地河南,苍术Atractylodes lancea (Thunb)DC.产地安徽,均购自本地药房。符合《 中国 药典》(2005版)Ⅰ部标准。
1.2 化学对照品 盐酸小檗碱对照品(批号110713-200609),购于中国药品生物制品检定所。
1.3 试剂 乙腈色谱级,美国TEDIA公司生产;磷酸二氢钾、三乙胺均为分析纯。
1.4 仪器 岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪,配SPD-10Avp紫外-可见检测器。电动玻璃组织匀浆机,宁波新芝生物科技有限公司提供。
1.5 动物 SD大鼠,体重180~240 g,雌雄各半,由安徽省医科大学动物中心提供,实验前和实验过程中正常饲养和饮水,并观察健康状况。
2 方法与结果
2.1 样品处理方法
2.1.1 血浆样品处理方法 按照 参考 图7 关节样品HPLC图
准确吸取小檗碱对照品溶液一定量,加入1 ml空白心脏组织匀浆上清液中,制成含小檗碱浓度为0.01,0.1,0.2,0.35,0.5 mg·L-1的标准溶液,同样品处理方法操作,进行HPLC测定。将测得的峰面积对浓度作回归曲线,所得的标准曲线为:A =5.321C +43.4 (0.01~0.5 mg·L-1,n=5,r=0.999 0),最低检测限为0.2 ng。
准确吸取小檗碱对照品溶液一定量,加入1 ml空白关节组织匀浆上清液中,制成含小檗碱浓度为0.01,0.04,0.1,0.2,0.35,0.5 mg·L-1的标准溶液,同样品处理方法操作,进行HPLC测定。将测得的峰面积对浓度作回归曲线,所得的标准曲线为:A = 4 992.8C +41.8(0.01~0.5 mg·L-1,n=5,r=0.999 3),最低检测限为0.16 ng。
2.2.4 回收率和精密度测定 以血液0.02 mg·L-1,心脏和关节组织0.04 mg·L-1 两种浓度考察测定回收率和精密度(日内、日间)。结果回收率和精密度均符合要求。
2.3 大鼠给药和组织分布的
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