不同产地丹参遗传关系的DNA标记分析.docVIP

　　不同产地丹参遗传关系的DNA标记分析 作者：徐红，王燕燕，王峥涛，胡之壁 【摘要】 目的分析不同产地丹参的遗传背景与遗传关系，为丹参药材的栽培育种提供依据。方法采用RAPD与ISSR标记对4个产地的野生丹参、6个产地的栽培丹参共计50个样本进行分析，利用分析软件 计算 遗传相似性，建立遗传聚类图。结果DNA标记共检测了102个位点，多态条带比率（P）为95.10%，栽培丹参的P值高于野生丹参；居群的总遗传变异Ht为0.238 9；UPGMA聚类可以将不同来源的丹参很好地区分开来。结论不同产地间的丹参存在丰富的遗传多样性，丹参种质在遗传背景上较为复杂，不同产地的丹参已出现明显的遗传分化，但是与地理分布没有相关性。 【关键词】 丹参； 遗传关系； DNA标记 　　Abstract：ObjectiveTo study the geic background and relationship of Salvia miltiorrhizae from different population, and provide reference for the seed selection and cultivation.MethodsGeic relationship of total 4 iltiorrhizae olecular dendrogram arkers orphic loci (P) ber of P among cultivation population from the clustering of UPGMA shoiltiorrhizae from different population shoong different S. miltiorrhizae, but the geic relationships did not shoiltiorrhizae; Geic relationship; DNA molecular markers 　　丹参Salvia miltiorrhiza Bge.为唇形科多年生草本植物，具有活血化瘀、消肿止痛、养心安神等功效，常被用于单方、成药、保健品及化妆品，是我国重要出口大宗药材之一。近年来，随着野生资源的减少，野生丹参已远远不能满足临床用药需求，全国许多地区开始栽培丹参，目前栽培品成为丹参的主要来源。但是由于丹参分布范围广，各栽培地区种源来源不同，以及长期无性繁殖导致的品种退化，给丹参的栽培和育种工作造成困难，同时也严重影响丹参的产量与药材的质量。本研究利用RAPD与ISSR标记对不同产地的野生与栽培丹参的遗传变异进行分析，以期为丹参药材的引种栽培与 科学 选育提供科学依据。 　 　1 仪器与材料 　　1.1 材料分别收集于我国丹参药材的主产区四川、山东、江苏、陕西、安徽及山西等地的野生和栽培药材，见表1。药材标本现存于上海中医药大学中药研究所，由吴立宏博士鉴定药材原植物学名。 　　1.2 仪器与试剂PTC-200型PCR仪（Bio-Rad, USA）；Image Master VDS (Pharmacia Biotech, USA)；Poan, USA)。DNA GenRulerTM DNA Ladder Mix (MBI Fermentas, USA)，CTAB、β-巯基乙醇、Tris、EDTA、琼脂糖均为分析纯；ISSR引物与RAPD引物由上海生工生物技术服务公司合成。 　　表1 丹参材料及其来源（略） 　 　2 方法 　　2.1 基因组DNA的提取与纯化参照Rogers的CTAB方法稍加改进提取基因组DNA［1］，并将基因组DNA用小量PCR产物纯化试剂盒(上海华舜生物工程有限公司)进行纯化处理，以除去丹参中影响PCR反应的色素及多酚类的次生代谢产物。 　　2.2 PCR-RAPD与PCR-ISSR分析优化的PCR-RAPD反应体系（10 μl）含10×PCR buffer 1 μl，MgCl2 (25 mmol/L)0.8 μl，dNTP mix (10 mmol/L)0.3 μl，RAPD引物1.5 μl（10 pmol/L），Taq DNA polymerase (5U/μl) 0.15 μl，模板溶液1 μl（5～10 ng），ddH2O适量。反应参数：① 94 ℃预变性5 min; ② 94 ℃变性45 s; ③ 36 ℃复性45 s; ④ 72℃延伸2 min; ⑤ 重复②～④步骤共37个循环; ⑥ 72℃保温5 min。优化的PCR-ISSR反应体系（10 μl）含10×PCR buffer 1 μl，MgCl2 (25 mmol/L)0.8 μl，dNTP mix (10 mmol/L)0.3 μl，ISSR引物1.5 μl（