实验十植物体内氧自由基的测定及清除.pptVIP

实验十 植物体内氧自由基的测定和清除 【实验原理】 通过呼吸作用进入生物体内的氧分子，参与酶促或非酶促反应时，只接受一个电子后转变为超氧阴离子自由基( )， 既能与体内的蛋白质和核酸等活性物质直接作用，又能衍 H2O2，羟自由基(·OH)，单线态氧(1O2)等。·OH可以引发不饱和脂肪酸脂质(RH)过氧化反应，产生一系列自由基，如：脂质自由基(·R)、脂氧自由基(RO·)、脂过氧自由基(ROO·和脂过氧化物(ROOH)。 基团旁边的小圆点为不成对价的电子，这种基团即称为自由基，带有个-O-O-的是过氧化物，1O2的电子处于激发状态。这些含有氧而又比O2活泼很多的化合物，称为活性氧，也有人将它们统归为氧自由基类。 一切需氧生物均能产生活性氧，在其体内有一套完整的活性氧清除系统(抗氧化酶和抗氧化剂)，能将活性氧转变为活性较低的物质，机体因此受到保护。 利用经胺氧化的方法可以检测生物系统中自由基含量。原理是： 与羟胺反应生成NO2- ， NO2-在对氨基苯磺酸和α-萘胺作用下，生成粉红色的偶氮染料，染料在λ540nm有显著吸收，根据OD540可以算出样品中的 含量。 【实验材料和设备】 大豆、绿豆、花生3d龄黄化幼苗 低温离心机、恒温水浴锅、分光光度计。 【实验步骤】 亚硝酸根标准曲线的制作 2mL系列浓度的NaN02(0、5、10、15、20、3