中性蛋白复合酶法提取大枣多糖的研究.docVIP

　　中性蛋白复合酶法提取大枣多糖的研究 【摘要】 　　目的考察中性蛋白复合酶法提取大枣多糖的工艺，并验证大枣多糖的部分药理作用。方法对不同提取方法作对比；以多糖的得率和纯度为指标，对效果较佳的中性蛋白复合酶提法安排正交实验，筛选提取工艺；最后进行动物实验。结果确定中性蛋白复合酶法提取的最佳工艺为：酶液浓度0.15%，pH 7.5，提取温度37℃；大枣多糖的药理实验表明大枣多糖属无毒级，大枣多糖大、中、小剂量对S180小鼠巨噬细胞吞噬率均有不同程度的提高作用。结论中性蛋白复合酶法提取大枣多糖工艺有效可行。 【关键词】 大枣多糖； 中性蛋白复合酶 ； 提取； 药理实验 　　Abstract：ObjectiveTo study the extraction technology for polysaccharide by pound neutral protease from Ziziphus jujuba, and to test the pharmacological function of the polysaccharide .MethodsDifferent methods of polysaccharide extraction ethod ,the pound neutral protease extraction , the orthogonal experiments acological experiments um conditions ate pharmacologic experiments about Zizyphus jujuba polysaccharide shoacrophage phagocytosis of S180 tumor mice.ConclusionThe acology experiment 　　大枣为鼠李科植物枣Zizyphus jujuba Mill 的成熟果实［1］，营养丰富，是传统的中药，其主要成分有多糖，蛋白质，氨基酸，维生素，生物碱，皂苷及矿物质等［2］。多糖能提高机体的免疫功能，是理想的免疫增强剂，同时对正常细胞没有毒副作用［3］。从大枣中提取多糖及其药理作用研究已有 　　表2 正交实验因素水平（略） 　　表3 中性蛋白复合酶最佳提取条件正交实验结果（略） 　　2.3 大枣多糖的药理实验取实验最佳工艺所得大枣多糖，经精制沉淀后，用于以下药理实验。 　　2.3.1 大枣多糖急性毒性实验取ICR品系小鼠40只，雌雄各半，分为两大组；A组20只，B组20只，给予B组灌胃大枣多糖（药物以生理盐水稀释，最大质量浓度45% ）。每20 g体重灌胃0.4 ml，每隔4 h重复1次，共3次，观察动物死亡数和死亡时间。给与A组灌胃等剂量生理盐水。结果未见动物死亡，亦未见动物有其他反应。表明动物最大耐受量在27.0 g·kg-1以上，相当于原生药675 g·kg-1，属无毒级。 　　2.3.2 大枣多糖对S180实体瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响取ICR品系小鼠50只。将接种7 d的S180实体瘤腹水型小鼠，消毒腹部皮肤，断头处死，抽取腹水，稀释3倍后，接种于各小鼠左侧腋下，皮下接种，每只0.2 ml。接种后第2天，称重 ，按体重分层随即将小鼠分为A，B，C，D，E 5组，A组为S180实体瘤对照组，B，C，D组分别为大、中、小剂量大枣多糖组，E组为环磷酰胺组。分组后开始给药，A组以生理盐水灌胃，B，C，D组分别按剂量为675，225和75 mg·kg-1的大枣多糖药液灌胃；E组灌胃剂量为每只0.6 mg（30 mg·kg-1）。以上各组均连续用药7 d。 　　于第7天前72 h腹腔注射0.5%无菌淀粉盐水0.1 ml/只，于第7天再注射淀粉溶液1次，1 h后腹腔注射0.5%鸡红细胞0.1 ml/只，6 h后脱臼处死小鼠，取腹腔液涂片染色镜检。油镜下计数200个巨噬细胞，观察吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数目。结果以吞噬率表示。结果见表4。 　　表4 大枣多糖对S180实体瘤小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响（略） 　　结果表明，大枣多糖大、中、小剂量对S180小鼠巨噬细胞吞噬率均有不同程度的提高作用，其中大、中剂量组有显著作用，有效剂量为225 mg·kg-1，小剂量组提高不明显。 　 　3 讨论 　　纯酶自身成本较高，酶的介入会直接增加大枣多糖提取的成本费用，而这种复合粗酶使用成本较低，其中还含有少量的纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、淀粉酶、这些酶相互之间可以产生协同作用，无疑对大枣多糖的提取十分有利。其中的主要成分中性蛋白酶主要可以使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解掉，那么，原有的除蛋白工艺步骤可以省略，进而简化了提取工艺，同时也可以达到一个较好的提取效果。 【 参