4第四讲电泳技术要点.pptVIP

电 泳 技 术 琼脂糖凝胶电泳技术 实验室常用琼脂糖有常熔点和低熔点两种类型。 低熔点(LMP)可用于DNA片段的回收。由于其凝胶中无抑制酶 ，可在凝胶中进行酶切、连接。 DNA电泳影响因素 1 DNA分子大小 2 DNA分子构型 一般，质粒DNA分子超螺旋的最快、线状分子次之、开环分子最慢。 3 凝胶浓度 对于 小片段DNA分子的分离采用高浓度的凝胶分离，对于大片段则用低浓度的凝胶。 DNA电泳影响因素 4 电场强度 电场强度高，电泳速度快，但分辨率低。 5 EB 6 电场缓冲液 TAE Tris-乙酸 TBE Tris-硼酸 TPE Tris-磷酸 50×TAE Buffer 配制方法 1. 称量Tris 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中； 2. 向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀； 3. 加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解； 4. 加去离子水定容至1L后，室温保存。 10×TBE Buffer配制方法 1.称量Tris 108g，Na2EDTA.2H2O 7.44g，硼酸55g 于1L烧杯中； 2.加入约800ml去离子水，搅拌均