Chimeric β-Lactamases Global Conservation of Parental Function and Fast Time-Scale Dynamics with Increased Slow Motions.docVIP

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2017-05-07 发布于上海
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Chimeric β-Lactamases Global Conservation of Parental Function and Fast Time-Scale Dynamics with Increased Slow Motions.doc

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Chimeric β-Lactamases Global Conservation of Parental Function and Fast Time-Scale Dynamics with Increased Slow Motions

Chimericb-Lactamases:GlobalConservationofParental FunctionandFastTime-ScaleDynamicswithIncreased SlowMotions ChristopherM.Clouthier1,2,Se′bastienMorin1,3,SophieM.C.Gobeil1,5,NicolasDoucet1,4 JonathanBlanchet1,2,ElisabethNguyen1,2,Ste′phaneM.Gagne′1,3,JoelleN.Pelletier1,2,5 , * 1PROTEO, the Que′bec Network for Research on Protein Structure, Function and Engineering, Universite′ Laval, Laval, Que′bec, Canada, 2De′partement de Chimie, Universite′deMontre′al,Montre′al,Que′bec,Canada,3De′partementdeBiochimie,MicrobiologieetBioinformatique,Universite′Laval,LavalQue′bec,Canada,4INRS–Institut Armand-Frappier,Universite′ duQue′bec, Laval,Que′bec, Canada,5De′partementdeBiochimie,Universite′ deMontre′al,Montre′al,Que′bec,Canada Abstract Enzymeengineeringhasbeenfacilitatedbyrecombinationofclosehomologues,followedbyfunctionalscreening.Inone sucheffort,chimerasoftwoclass-Ab-lactamases–TEM-1andPSE-4–werecreatedaccordingtostructure-guidedprotein recombinationandselectedfortheircapacitytopromotebacterialproliferationinthepresenceofampicillin(Voigtetal., Nat.Struct.Biol.20029:553).Toprovideamoredetailedassessmentoftheeffectsofproteinrecombinationonthestructure andfunctionoftheresultingchimericenzymes,wecharacterizedaseriesoffunctionalTEM-1/PSE-4chimeraspossessing between 17 and 92 substitutions relative to TEM-1 b-lactamase. Circular dichroism and thermal scanning fluorimetry revealedthatthechimerasweregenerallywellfolded.Despiteharbouringimportantsequencevariationrelativetoeitherof thetwo‘parental’b-lactamases,thechimericb-lactamasesdisplayedsubstraterecognitionspectraandreactivitysimilarto theirmostclosely-relatedparent.Togainfurtherinsightintothechangesinducedbychimerization,thechimerawith17 substitutionswasinvestigatedbyNMRspinrelaxation.Whilehighorderwasconservedontheps-nstimescale,ahallmarkof class A b-lactamases, evidence of additional slow motions on the ms-ms timescale was extracted from model-free calculations.Thisisconsistentwiththegreaternumberofresonancesthatcouldno