第2章色谱法导论.pptVIP

分离分析篇 第二章 色谱法导论 第一节 概述 1、色谱法的概念 概念 色谱法又称色层法、层析法，是用于多组分有机混合物的一种高效分离技术。 特点　 选择性好、分离效能高、灵敏度高、分析速度快等优点。　　 先进性 已逐步实现仪器化、自动化、高速化，并从分离手段发展到分析手段，应用范围不断扩大，分离的对象早已不限于有色物质，但“色谱法”这一名称一直被沿用。 范围 色谱法与现代新检测技术和计算机技术相结合，已广泛食品质量与安全等的有关工作，如样品中农药残留量的测定、农副产品分析、食品质量检验、生物制品的分离制备等。 2、色谱法的起源 1906年，俄国植物学家茨维特首创了这种分离技术，他把植物叶绿体色素的石油醚浸渍液倒入一根装有碳酸钙吸附剂的细直玻璃柱中，再加入纯石油醚，任其自由流下，原混合物开始被分离成不同颜色的谱带(色素的分离)，且以不同速度通过子，然后按谱带颜色对混合物进行鉴定分析。茨维特把这种分离结果称为色谱图，把这种分离方法命名为色谱法（chromatography）。 此后，出现了种类繁多的各种色谱法。 3、色谱法的本质 色谱法共同的基本特点是具备两个相：不动的一相，称为固定相；另一相是携带样品流过固定相的流动体，称为流动相。 当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 色谱法是基于混合物各组分在两相(固定相和流动相)之间的不均匀分配进行分离的一种方法。 目前色谱法已广泛应用于许多领域，成为十分重要的分离分析手段。许多气体、液体和固体样品都能找到合适的色谱法进行分离和分析。 4、色谱法的分类 （1）按两相状态分类 气体为流动相的色谱称为气相色谱（GC）， 气固色谱（GS C）固定相是固体吸附剂； 气液色谱（GLC）固定相是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体）。 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC）， 液固色谱（LSC）； 液液色谱（LLC）。 超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱（SFC）。 随着色谱工作的发展，通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）。 （2）按分离机理分类 吸附色谱法：利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法。 分配色谱法：利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法。 离子交换色谱法：利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法。 凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法：利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法。 亲和色谱法：最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术，常用于蛋白质的分离。 a.吸附色谱法 原理: 被分离物与吸附剂表面分子相互作用而被吸附，由于不同化合物结构及性质上的差异，在吸附剂上的吸附性能是不同的，在色谱分离过程中，用一定的溶剂系统洗脱柱子时，由于溶剂(洗脱剂)与混合物里各组分争夺吸附剂的活性表面，解吸出来的组分与溶剂始终存在着对吸附剂的竞争吸附，洗脱剂对不同的物质的洗脱能力也是不同的。 特点: 因此吸附与解吸始终贯穿整个色谱过程，吸附与解吸是吸附色谱法的理论基础。吸附过程无选择性，吸附与解吸附过程可逆，但吸附强弱和先后顺序都基本遵循“相似相吸附”的经验规律。吸附力最弱的组分随溶剂首先流出。 常用极性吸附剂: 硅胶、氧化铝、聚酰胺。 b.分配色谱 原理: 将两相溶剂中的一相涂覆在硅胶等载体上作为固定相，再用与固定相不相混溶的另一相溶剂作为流动相，物质可在两相溶剂相对做逆流移动过程中不断进行动态分配而得以分离。 分类: 正相色谱：固定相采用强极性溶剂，如水、缓冲溶液等，流动相则用氯仿等弱极性溶剂，称之为正相(normal phase)色谱； 反相色谱：以弱极性成分如石蜡油为固定相，流动相则以水、乙腈、甲醇强极性溶剂，则两相可以颠倒，称之为反相(reverse phase)色谱，更适合于水溶性成分的分离。 液—液分配色谱的分离条件可以基于相应的正相及反相分配薄层层析结果加以选定。 c.离子交换色谱 原理: 以离子交换树脂或表面涂有液体离子交换树脂的固体颗粒为固定相，装在柱中，以水或含水溶剂为流动相，使样品溶液流过交换柱，溶液中的中性分子及具有与离子交换树脂可交换基团相反电荷的离子通过柱子从柱底流出，而具有相同电荷的离子则与树脂上的交换基团进行离子交换并被吸附到柱上。 规律：由于不同离子与同一树脂交换能力不同，移动速度也不同，在柱上