实验教案培养基的制备.docVIP

实验一 培养基的制备 一目的要求 1 明确培养基的配制原理 2 通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤 二 基本原理 不同培养基中含有不同的微生物生长所需要的营养物质，其可供微生物生长繁殖用，为微生物提供C源、能源、N源和维生素。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96度溶化，实际应用时，一般在沸水中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免烧焦，琼脂在40度时凝固，通常不被微生物分解利用，固体培养基中琼脂含量根据琼脂的质量和气温的不同有所不同。 牛肉膏蛋白胨培养基： 牛肉膏：3.0g,蛋白胨10.0g,NACl5.0g,水1000ml,pH 7.2-7.4. 马铃薯培养基是霉菌的基本培养基，培养基配方如下： 马铃薯 100g 蔗糖 10g 琼脂 10g 水500ml pH 自然 三器材： 1试剂或溶液：马铃薯、蔗糖、琼脂、蒸馏水。 2仪器或其它用具：试管、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、牛角勺，纱布、麻绳、牛皮纸、高压灭菌锅 四操作步骤 1称量： 依次称取马铃薯块、蔗糖、，切碎的琼脂放入三角瓶中并加入500ml蒸馏水 2 把三角瓶放入锅中，锅盖好后放在电热炉上加热，等琼脂溶解后取出三角瓶 3过滤：趁热用多层纱布过滤，去除里面的杂质 4分装：将配制好的培养基分装入试管。 5加塞：分装完后在试管口塞上塞子，以阻止外界微生物进入培养基造成污染，并保证有良好的勇气性能。 6包扎：用牛皮纸再包扎瓶口，以防灭菌时弄湿棉塞。 7灭菌：用高压蒸汽锅在0.1MP下灭菌20min 8搁置斜面：趁热将试管里的培养基斜面，注意斜面的长度大约为试管长度的1/2 9无菌检查 五：注意事项 1培养基配制后，必须立即灭菌 2分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾在塞子上而引起污染 实验二 革兰氏染色法 一目的要求 1学习并初步掌握革兰氏染色法 2了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性 二基本原理 革兰氏染色法是1884年丹麦病理学家christain Gram 创立的而后作了些改进，革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。 革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行染色，再用碘液媒染，然后用乙醇脱色，最后用复染剂复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌。如果细胞中初染剂被脱色剂洗脱而细菌染上复染剂的颜色，该菌属于革兰氏阴性菌。 革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。实际上，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色，碘作为媒染剂，它能结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力，当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的，革兰氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色时细胞壁脱水，使肽聚糖的网状结构孔径缩水，透性降低，从而合结晶紫-碘复合物不易被洗脱，而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂 的蓝紫色，革兰氏阴性菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 三器材 1菌种 大肠杆菌 2染色剂：革兰氏染色液 （1）草酸铵结晶紫：A 液：结晶2g：95%乙醇20ml; B 液：草酸铵0.8g;蒸馏水80ml; 混合AB两液，静置48h后使用（） (2)卢戈氏碘液 碘片1g;碘化钾2g;蒸馏水30ml; (3)95%乙醇 （4）番红复染液：番红25g;95%乙醇 100ml 取上述配好的番红乙醇溶液10ml和 80ml蒸馏水混匀即成。 3仪器或其他用具 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 蒸馏水 四 操作步骤 1制片 （1）涂片：取载玻片，各滴一小滴蒸馏水于玻片中央，有接种环无菌操作挑取菌苔于水滴中，混合 并涂成薄膜。 （2）干燥：室温自然干燥 （3）固定：涂面朝上，通过2~3次 2 初染 滴加结晶紫染色1-2Min,水洗 3 媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1min，水洗 4 用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在魄背景下，用滴管流加95的乙醇脱色，直到流出的乙醇无紫色时，立即水洗，脱色时间一般20-30min 5复染 用番红复染2min,水洗。并用吸水纸吸干玻片上的残水。 6镜检 干燥后，用显微镜观察。 菌体被当成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的革兰氏阴性菌。 实验三 酵母菌的形态观察及死活细胞的的鉴别 一目的要求 1观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活的实验方法 2 掌握酵母菌的一般特征及其与细