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1．固定化酶、固定化细胞技术 2．酵母细胞固定化 专题4 酶的研究与应用 课题3 酵母细胞的固定化 一、酶制剂的优点与缺点： 1. 酶制剂的优点： 催化效率高、低能耗、低污染等。 2. 酶制剂的缺点： （1）通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件 非常敏感，容易失活； （2）溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提 高了生产成本； （3）反应后会混在产物中，可能影响产品质量。 固定化酶技术： 用物理或化学方法将酶固定在一定空间内的技术。 二、固定化酶的应用实例——生产高果糖浆 1. 高果糖浆的生产原理： 葡萄糖异构酶 果糖 葡萄糖 2.优点 （1）反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本. （2）提高了果糖的产量和质量。 、固定化酶 二、固定化酶的应用实例——生产高果糖浆 3. 固定化酶技术的优点： 4. 固定化酶技术的缺点： 使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；固定 在载体上的酶可以被反复利用。 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实际中 很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能进 行，所以操作比较麻烦。 三、固定化细胞技术 1. 概念： 用物理或化学方法将细胞固定在一定空间内的技术。 2.将酶或细胞固定化的方法 包埋法 化学结合法 物理吸附法 将酶（或细胞）包埋在细微网格里 将酶（或细胞）相互连接起来 将酶（或细胞）吸附在载体表面上 三、固定化细胞技术 3. 酶和细胞固定方法的选择 （1）方法 ①酶适合采用化学结合和物理吸附法固定 ②细胞适合采用包埋法固定 （2）原因 ①细胞个大，酶分子很小 ②个体大的细胞难以被吸附或结合， 个小的酶容易从包埋的材料中漏出 三、固定化细胞技术 4. 固定化细胞常用的载体 5. 固定化细胞技术的优点： 常用的不溶于水的多孔性载体 可催化一系列化学反应，成本低，操作容易。 6. 固定化细胞技术的缺点： 固定后的细胞与反应物(尤其是大分子物质)不容易接近，可能导致反应效果下降。 四、固定化酵母细胞 （一）制备固定化酵母细胞 1. 酵母细胞的活化 （1）什么是活化？ 活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常 生活状态的过程。 （2）怎样活化？ 1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→ 放置1h 四、固定化酵母细胞 （一）制备固定化酵母细胞 1. 酵母细胞的活化 2. 配制物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液 4. 海藻酸钠溶液与酵母细胞混合 3. 配制海藻酸钠溶液（小火或间断加热？） 思考：为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入 酵母细胞？ 防止高温杀死酵母细胞 5. 固定化酵母细胞 CaCl2溶液 凝胶珠 四、固定化酵母细胞 （二）用固定化细胞发酵 1. 冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗 2～3次。 如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻 酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少； 如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海 藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。 2. 发酵：150mL10％葡萄糖＋固定化酵母细胞 →200mL锥形瓶→密封→25℃发酵24h。 思考：直接使用酶、固定化酶与固定化细胞各有什么优缺点？ 类型 优点 不足 直接使用酶 催化效率高，低耗能、低污染等。 对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。 固定化酶 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用。 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的。 固定化细胞 成本低，操作更容易。 固定后的酶或细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降等。 * *