多抗制备.pptVIP

根据半抗原拥有的化学基团不同，连接方法主要有以下几类： ①带游离氨基或羧基以及二种基团皆有的半抗原：羧基可用混合酸酐法和碳二亚胺法与载体氨基形成稳定的肽键，带氨基的半抗原则可与载体羧基缩合。 ②带有羟基、酮基、醛基的半抗原：不能直接与载体连接，需要用化学方法如琥珀酸酐法、O-（羧甲基）羟胺法等方法将之转变为带有羧基的半抗原衍生物后才能与载体连接。 ③带有酚基的半抗原，可用一氯醋酸钠法或重氮化的对氨基苯甲酸法，生成带有羧基的半抗原衍生物。 * （四）免疫佐剂 某些物质与抗原一起或先于抗原注入机体，可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型，此类物质称为免疫佐剂(immunoadjuvant)，简称佐剂。 * 佐剂的种类 佐剂一般包括以下几类： ①无机佐剂： 如氢氧化铝、明钒等 ②生物性佐剂： 如结核分枝杆菌、卡介苗、小棒状杆菌、百日咳杆菌、革兰阴性杆菌内毒素、霍乱毒素的B亚单位、胞壁酰二肽和细胞因子等； ③人工合成佐剂： 如双链多聚肌苷酸：胞苷酸（poly I：C）、双链多聚腺苷酸：尿苷酸（poly A：U）； ④油剂：如弗氏完全佐剂、花生油乳剂等； ⑤纳米佐剂 * 弗氏佐剂（Freund’s adjuvant）,分为弗氏不完全佐剂和完全佐剂两种： 前者是由油剂（矿物油或花生油）和乳化剂（羊毛脂或吐温-80）按1：1～1：5比例混合而成； 后者由弗氏不完全佐剂加卡介苗组成。在免疫动物时，先将弗氏佐剂与抗原等比混匀，制成“油包水”乳化液。 * 佐剂与抗原混合乳化的方法： 研磨法 搅拌混合法 * 2. 佐剂的免疫生物学作用 ①增强抗原免疫原性：使无或微弱免疫原性的物质变成持久或强的免疫原； ②增强机体对抗原刺激的反应性，提高初次应答和再次应答所产生的抗体滴度； ③改变抗体类型，使产生抗体由IgMG型转变为IgG型； ④引起或增强迟发性超敏反应。 * 3. 佐剂的作用机制 佐剂的作用机制归纳起来主要有如下几种： ①可增强抗原的表面积和改变抗原活性基团构型，从而增强抗原的免疫原性。 ②佐剂与抗原混合一起注入机体，可改变抗原的物理性状，形成抗原储存库，延长抗原在局部组织的滞留时间，有利于抗原的缓慢释放。 ③增强吞噬细胞的吞噬作用（被佐剂吸附的抗原易被吞噬细胞吞噬），促进对抗原的处理，刺激淋巴细胞增生，从而增强和扩大免疫应答的效应。 * 二、动物免疫 （一）免疫动物的选择 选择动物时应考虑以下因素： ①抗原来源与动物种属的关系。抗原的来源与免疫动物种属差异越远，其免疫源性越强，免疫效果越好，而同种系或亲缘关系越近，免疫效果越差。 ②动物个体的选择。适龄、健康、体重符合要求的正常动物（以雄性为佳）；抗体需要量少时，选用家兔、豚鼠和鸡等小动物；抗体需要量大时，可选用绵羊、山羊、马、驴等大动物。 ③抗原性质与动物种类 * （二）免疫方法 选定动物后，在免疫过程中应考虑免疫剂量、免疫途径、免疫次数、免疫间隔等因素。 (1) 免疫原的剂量：免疫原的接种剂量按免疫原性的强弱、动物的个体状态和免疫时间来确定。首次免疫时，剂量不宜过大，以免产生免疫麻痹。 * (2) 免疫途径与免疫间隔时间 免疫途径通常有皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、淋巴结等，视不同的免疫方案而异。对于不易获取的宝贵抗原可采用淋巴结免疫法。 免疫间隔时间是影响抗体产生的重要因素，其中首次与第二次免疫的间隔时间尤为重要，一般以10～20天为佳，二次后间隔时间一般为7～10天，若间隔时间太长，则刺激减弱，抗体效价不高。 * 常规制备痢疾致贺菌、伤寒杆菌抗血清的免疫方案 日期（天） 1 6/7 11/14 16/21 21/27 26/34 途径 皮内 静脉 静脉 静脉 静脉 静脉 抗原 热杀死菌 热杀死菌 活菌 活菌 活菌 活菌 剂量（mL） 1.0 0.5 0.2 0.5 1.0 2.0 * 常规制备NDV、VSV抗血清的免疫方案 日期（天） 1 6/7 11/14 16/21 21/27 26/34 途径 皮内 静脉 静脉 静脉 静脉 静脉 抗原 弗氏完全佐剂 单纯抗原 单纯抗原 单纯抗原 单纯抗原 单纯抗原 剂量（mL） 1.0 0.5 0.2 0.5 1.0 2.0 * 三、动物采血 采集免疫血清前，要预先测试抗体效价测定，若效价达到要求，应在末次免疫后一周及时采血，否则抗体效价会下降。 (1) 颈动脉采血法 (2)心脏采血法 (3)静脉采血法 * 颈动脉分离图 * 四、免疫血清的鉴定 1. 效价的测定：颗粒性抗原可采用凝集试验，可溶性抗原常用双向免疫扩散试验、E