定性酶免疫测定的数.pptVIP

Cut-off值批间差异的控制 ELISA测定每次的Cut-off值都会有所差异。但只要这种差异是在允许的范围内，就不会影响Cut-off值的应用。 通常有这样几种方法来控制Cut-off值的批间变异，即（1）测定多份（如50份）正常人血清，确定其吸光度均值＋3SD为试剂盒内阳性参考血清测定吸光度的40％。因此，在使用该试剂盒的临床检测中，可将这种参考血清作为测定控制的一个内标准，以校准试验系统的Cut-off值。（2）在测定中包括标准化的阳性混合血清和阴性混合血清。（3）还有一个简单的非参数方法是测定许多阴性血清，于是将Cut-off值设于95％的阴性血清的吸光度值低于此值处，然后将确定的关键的参考血清包括在试剂盒内作为内标准。 * 定性酶免疫测定结果判断及报告 结果判断：按试剂盒所定的CUT-OFF值判断阴或阳性结果，不能以其它标准判断。 结果报告：阴性或阳性。灰区内的结果建议患者过一段时间复查。 * 感染性病原体抗原抗体的定量测定？ 乙肝“两对半” 抗HCV 梅毒抗体 抗HIV * 谢 谢！ * 定性酶免疫测定的数据处理及结果报告 卫生部临床检验中心 李金明 * 定性？定量？ 定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果；半定量测定虽介于定性和定量之间，但从严格意义上来说，其仍属于定性测定，只不过其对定性测定中的“阳性”作了进一步的分级，即所谓的强阳性·阳性·弱阳性的区别； 定量测定的结果则以浓度（如IU/L、ug/L等〕的方式表达。 * 定性测定结果确定的依据 定性测定结果确定的依据在于阳性?阴性判定值（Cut-off）的建立， Cut-off 值的确立应尽可能地避免假阳性或假阴性结果的出现。除了 Cut-off 值以外，还有许多其它的设值方法以判断阴性和阳性结果，如S/N（常称为P/N）比值（Ratio）等。 * 与酶免疫测定数据处理和结果报告有关的概念 标准差 适用于正态分布的标准差（SD），不能泛泛地用于酶免疫测定结果的判定。这是因为阴性参考血清的酶免疫测定值的分布常为非正态分布，呈一正向偏斜。 * 概念 变异系数 重复性（Reproducibility）：一般通过重复两次测定样本来观察。 测定下限（Detectability）：是指超过零剂量精密度的最低抗原浓度，可通过 t 分布（一边拖尾，因为此时曲线只有上升趋势）计算在测定下限时的吸光度值的均值差。 测定敏感性（Sensitivity): 是指一实验的测定反应对待测物质浓度变化的改变，即dR/dC。 * 概念 阳性测定能力指数（DI（＋））可定义为一实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力（通常称为“敏感性”）； DI（＋）=[真阳性/（真阳性+假阴性）]×100% 阴性测定能力指数（DI（－））则为对阴性样本测定给出阴性结果的能力（通常称为“特异性”）； DI（－）= [真阴性/（真阴性+假阳性）]×100% * 概念 阳性结果的可靠性（‘预示值’）即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100% 阴性结果的可靠性则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100% * 测定结果的报告和数据处理 酶免疫测定数据处理报告在理想情况下应达到下述要求:(1)易于让不熟悉该试验的人所理解;(2)定性测定必须结果明确,即阳性或阴性、反应或不反应、在正常范围内或不正常等；（3）定量测定的线性；（4）数据的可重复性；（5）试验的评价不应建立在假定的正态分布上；（6）结果用于进一步分析处理（如流行病学分析）的充分性。 * 定性酶免疫测定的CUT-OFF值 * 确定CUT-OFF值的方法一 使用阴性血清测定结果均值的2或3倍作为阳性判断值：取一定数量（通常较少）的阴性血清样本，使用已建立的酶免疫测定方法或试剂盒测定，如果上述阴性血清样本的吸光度均值为0.05，则该次测定的阳性判断值为0.10或0.15。例如现有的试剂盒结果的判定以P/N或S/N≥2.1为阳性，其依据即是以阴性参考血清的2倍作为阳性判定值。这种Cut-off值设定方法，可以较为避免假阳性结果的出现，但假阴性可能比例较高。总的来说，这是一种非常粗糙的Cut-off值设定方法。 * 确定CUT-OFF值的方法二 首先测定大量（数千）正常人血清样本，然后将所得到的吸光度均值＋2或3个SD作为阳性判断值：当正常人血清样本数量足够大时，使用特定的酶免疫测定方法测得的吸光度值将呈正态分布，在具有95.3％(单侧)的可信度的情况下，可以将从正常人血清测得的吸光度均值＋2SD作为阳性判断值；如要求99％(单侧)的可信度，则以吸光度均值＋3SD作为阳性判断值。与第一种方