2016-2017学年人教版选修1多聚酶链式反应（PCR）课件(37张）.ppt

DNA Marker NGF ←2000bp ←1000bp ←750bp ←500bp ←250bp ←100bp 220bp→ PCR引物设计 一对引物，分别与靶DNA5’和3’端互补 长度：15～30个核苷酸 引物内、引物间不应有互补序列 引物与非特异扩增区无同源性 引物的设计可以参照： 两分钟StepByStep学会引物设计软件 Primer premier5.0/oligo软件 核酸基因技术讨论版/生物信息学讨论版/ PCR技术讨论版 引物设计： 1.长度在15-30bp，GC含量在45-55%之间。 Tm=4(G+C)+2(A+T)。 2. 碱基分布表现出随机性，避免相同碱基连续 排列。 3. 3’不能与引物内部互补，以免形成二级结构。 4. 两个引物各自的3’不能互补，以免形成自身 扩增。 5. 引物必须经GenBank查询后，证实没有与其他 非目的DNA高度互补，才能使用。 PCR的反应特点 特异性强 灵敏度高：PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将pg=10- 12级的起始待测模板扩增到微克(?g= 10 -6)水平 简便、快速：PCR反应一般在2～4 小时完成扩增反应 对标本的纯度要求低： DNA 粗制品可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体液、毛发、细胞、活组织等扩增检测 五、注意事项  ⑴　使用的全部溶液都应该没有核酸和核酸酶的污染. ⑵　所有PCR试剂中使用的水都应该是最高质量的三蒸水. ⑶? 所有试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后再分装成仅够一次使用的量储存,从而确保每次扩增实验之间的一致性. 普通高中课程 标准实验教科书 生物 选修 1 生物技术实践 专题4 DNA与蛋白质技术课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 课程标准 具体内容标准尝试PCR（ DNA多聚酶链式反应）技术的基本操作和应用 。 活动建议用某一DNA片段进行PCR扩增。 专题五 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 多聚酶链式反应扩增DNA片段 教材内容: 基础知识 (一) PCR原理 (二) PCR的反应过程 实验操作 操作提示 结果分析与评价 课题延伸 练习 一、课题目标 本课题通过尝试PCR（DNA多聚酶链式反应）技术的基本操作，使学生体验PCR这一常规的分子生物学实验方法，理解PCR的原理，讨论PCR的应用 教材分析 二、课题重点与难点 课题重点：PCR的原理和PCR的基本操作。 课题难点：PCR的原理。 教材分析 三、课题背景分析 课题背景首先介绍了PCR是一种在体外迅速扩增DNA片段的技术，然后说明这一技术在遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、基因克隆等方面都有着广泛的应用，最后指出本课题的目标是了解PCR技术的基本原理，并尝试用PCR技术扩增DNA片段。教师在导入本课题的学习时，可以先让学生谈一谈对PCR的认识以及PCR的应用，以激发学生的学习兴趣，然后再说明本课题的目标。 教材分析 四、基础知识分析与教学建议 （一）PCR原理 知识要点：1.细胞内参与DNA复制的各种组成 成分与反应条件；2.DNA的合成方向；3.Taq DNA聚合酶的应用。 教材分析 （一）PCR原理 教学建议： 理解PCR的原理，需要首先了解细胞内参与DNA复制的各种组成成分与反应条件。教师在教学过程中，可以首先引导学生回忆必修2《遗传与进化》中的有关DNA复制的知识。在此基础上，学生需要进一步了解DNA双链的方向，能够区分DNA的3′端和5′端。此外，学生还需要了解DNA聚合酶的特性，如只能从DNA的3′端开始延伸DNA链、而不能从头合成DNA等。 教学建议 （一）PCR原理 教学建议： Taq DNA聚合酶的应用，解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化，是一个重要的知识点。教师可以结合专题2中课题2“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”Taq细菌的发现过程，帮助学生加深理解。 教学建议 （二）PCR的反应过程 知识要点：PCR的基本步骤及每个步骤所发生的变化。 教材分析 （二）PCR的反应过程 教学建议： 这部分内容的教学应以读图识图为主。教科书中图5-9“PCR反应过程图解”详细地描绘了参与PCR的各组成成分；每一轮反应的三个基本步骤──变性、复性和延伸；每一轮中每一个步骤所发生的变化，即每个步骤所具有的作用。教师在教学中可以请学生在读图的同时，结合教科书中的文字说明来加深理解。当学生遇到难以理解的地方时，教师要及时给予解答。 教学建议 (一) PCR