2016-2017学年度人教版选修1DNA的粗提取与鉴定课件（35张）.ppt

一、实验材料的选取 从下列材料中你会选什么做DNA的提取？ 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌 原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 鸡血细胞液 静置 或 离心 加入柠檬酸钠溶液：防止鸡血凝固。 新鲜鸡血 一、实验材料的选取 鸡血细胞液 加入蒸馏水 目的：使细胞吸水涨破，释放出细胞中的DNA 二、DNA的粗提取 1.破碎细胞，获取含DNA的滤液 二、DNA的粗提取 1.破碎细胞，获取含DNA的滤液 要提取植物细胞的DNA怎么办？ 用洗涤剂溶解细胞膜 洗涤剂能瓦解细胞膜，但对DNA没有影响 过滤 鸡血细胞液 获得含DNA的滤液 二、DNA的粗提取 1.破碎细胞，获取含DNA的滤液 DNA,还有蛋白质等 细胞膜、细胞器等大颗粒杂质 二、DNA的粗提取 2.去除滤液中的杂质 资料1：DNA的溶解性 在较高盐溶液中，蛋白质会析出，NaCl溶液浓度从2mol/l降低的过程中，蛋白质的溶解度逐渐增大 ? 溶解规律 2 mol /L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液 DNA ? ? ? 蛋白质 溶液浓度从 2 mol /L 降低过程中，蛋白质溶解度逐渐增大 ? ? 资料1：DNA的溶解性 溶解 析出 析出 溶解 DNA溶解液 含DNA的滤液 加入浓度2mol/L的NaCl溶液 二、DNA的粗提取 2.去除滤液中的杂质 方案一： 过滤 滤液 过滤 加入蒸馏水。 目的：降低NaCI的浓度，析出DNA。 获得DNA的黏稠物 二、DNA的粗提取 2.去除滤液中的杂质 方案一 加入浓度为2mol/l的氯化钠溶液 二、DNA的粗提取 2.去除滤液中的杂质 方案一 过滤 滤液 二、DNA的粗提取 2.去除滤液中的杂质 资料2：DNA对酶的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 方案二： 资料3：DNA对高温的耐受性 大多数蛋白质不能忍受60～80℃,而DNA在80℃以上才会变性。 方案三： 直接在滤液中加嫩肉粉，反应10～15min。 将滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温10～15min，过滤。 加入冷却的酒精溶液 含DNA的滤液 析出DNA 析出的丝状物 二、DNA的粗提取 3.DNA的析出 DNA不溶于酒精溶液，但某些蛋白质可溶 加入2mol/L氯化钠溶液 不加入丝状物 加入二苯胺试剂 DNA + 二苯胺 蓝色 加入2mol/L氯化钠溶液 加入丝状物 加入二苯胺试剂 三、DNA的鉴定 动手实践 以鸡血为实验材料： 1.向10ml鸡血细胞液中加入20ml蒸馏水，搅拌5min。 2.3～4层纱布过滤，取滤液。 3.加入2倍体积的2mol/lNaCl溶液，搅拌1min。 4.贴壁缓慢加入蒸馏水，直至粘稠物不再增加。 5.3～4层纱布过滤，得DNA粘稠物。 6.用2mol/lNaCl溶液20ml溶解DNA粘稠物，搅拌3min 7.3～4层纱布过滤，取滤液。 8.贴壁缓慢加入40ml预冷的酒精，缓慢、均匀搅拌得丝状物，取出丝状物。 9.鉴定：用2mol/lNaCl溶液5ml溶解丝状物，再加二苯胺试剂4ml，水浴加热。 以菜花为实验材料： 1.取菜花30g,去梗取花，切碎 2.将碎菜花放入研钵中，倒入15ml研磨液，充分研磨10min 3.过滤，取滤液。 4.贴壁缓慢加入两倍体积预冷的酒精，缓慢、均匀搅拌得絮状物，取出絮状物。 5.鉴定：步骤同左第9步 刑侦破案 DNA提取的应用 基因组测序 插入人胰岛素基因的大肠杆菌 基因工程 亲子鉴定 专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、基础知识 （一）提取DNA的方法 1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2.提取DNA的基本思路 提取DNA，去除其他成分 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等 在物理和化学性质方面的差异 ⑴ DNA的溶解性 DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点， 选择适当的盐浓度 就能使DNA充分溶解， 而使杂质沉淀； 或者让其他成分溶解， DNA析出 3.DNA等大分子的理化性质 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 ⑶ DNA对酶、高温和 洗涤剂的耐受性 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ 　　在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 　　当氯化