2016-2017学年度人教版选修1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件（19张）.ppt

课题二 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 研究思路 筛选菌株 统计菌落数目 设置对照 1、实例： PCR技术 方式：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制(PCR)的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： 从物理性质看此培养基属于哪类？碳源、氮源分别是什么？ 固体培养基 葡萄糖 尿素 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，其他微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基 1、显微镜直接计数： 利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点（了解） 2.稀释涂布平板法计数 ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 （2）计算 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 说明设置重复组的重要性。在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 阅读课本22页中间的资料并思考问题作出回答 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低（两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的只是一个菌落）。 （三）设置对照 判断培养基中是否有杂菌污染： 将未接种的培养基同时进行培养。 判断选择培养基是否具有筛选作用： 完全培养基（营养成分齐全）接种后培养 观察菌落数目。 主要目的是排除实验组中非测试因素对实验 结果的影响，提高实验结果的可信度。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因： ⑴土样不同 ⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 “微生物的天然培养基” [一]土壤取样 数量最大、种类最多 大约70%—90%是细菌 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 应在火焰旁称取土壤10g。 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 分离不同的微生物采用不同的稀释度 细菌数量，选用104、105和106的稀释液； 放线菌数量，选用103、104和105的稀释液； 真菌数量，选用102、103和104的稀释液 考点！！！ （二） 样品的稀释 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 （三）.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 （四）细菌计数和计算 菌落形状、大小、隆起程度和颜色 [一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在