植物组织培养的基.pptVIP

不同部位产生不同脱分化效果 * 二、再分化（Re-differentiation） 1、概念 ：指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株。 （1）细胞水平再分化：首先是细胞壁变厚、假导管细胞的形成，以及酶水平的变化和明显的机能分化，从而形成各种类型的细胞。 （2）组织水平再分化：在高水平生长素条件下，最常见的是维管组织（Vascular tissue）的分化. 松散的愈伤组织内含大量拟分生组织或瘤状结构；致密的愈伤组织内组织分化很少，大多由高度液泡化的细胞组成。 * （3）器官水平再分化 ： 依起源不同，分器官型（Organ ）和器官发生型（Organogenesis ）。 器官型：直接由外植体细胞形成器官原基，继而发育成器官； 器官发生型：外植体先形成愈伤组织，再由愈伤组织产生不同的器官原基。 * （4） 植株再生：根和茎（包括其变态器官）或芽器官的发生可使植株重建。 器官发生再生植株的方式大致有： A 先形成芽，芽的基部后产生根； B 先形成根，根上再出芽； C 愈伤组织的不同部位形成芽和根，然后形成微管束组织把两者结合起来. 一些变态茎、叶器官，离体培养易于形成相应的变态器官。 * 2、影响细胞再分化因素： 从理论上讲，在离体培养条件下经过再分化可获 得各种类型的细胞、组织、器官以及再生植株。但是目前，还不能使所有植物的活细胞都再生植株。主要原因是： （1）不同植物种类再分化的能力差异较大； （2）对某些植物再生条件还没有完全掌握。 * 三、愈伤组织（Callus）培养 1、愈伤组织形成 在脱分化的过程中，多形成Callus, 其细胞结构多是异质性的，无明显极性。 （1）诱导期：细胞准备进行分裂， 细胞大小几乎不变，生理生化变化大，迅速合成蛋白质和核酸。 （2）分裂期：外层细胞分裂，中间细胞常不分裂，形成小芯。细胞分裂快，结构疏松，缺少结构，浅而透明。在原培养基上，细胞会发生分化，及时转移，其可无限制地进行细胞分裂，维持不分化状态。 （3）分化期：停止分裂的细胞发生生理代谢变化，出现形态和功能各异细胞。 * （1）生长：诱导期后，外植体外层细胞分裂，在组织受伤表面形成一层愈伤组织， Callus的细胞数目迅速增多，表层细胞平均重量下降，体积变小；降低温度，可以使细胞生长速度减慢，平均大小可增加。 （2）质地类型：松脆和致密两种。 高浓度生长素，可使Callus变得松脆；高浓度细胞分裂素，则可使致密。 （3）生理生化变化： RNA，同工酶谱带，次生物质合成能力，对激素的驯化（1年或继代培养10代以上）。 2、愈伤组织的生长 * 不同生长素浓度下的愈伤组织形成率 * * 不同类型的愈伤组织及其分化 * 3、愈伤组织的保持 – 转接 在多数情况下，随着继代培养代数增加和培养时间的延长，Callus长势下降、褐变、分化和形态发生能力下降、降低甚至死亡。 主要原因：遗传因素，染色体畸变、基因突变； 生理因素，细胞或组织内激素平衡的改变，细胞对外源生长物质的敏感性改变. 后者可以通过调控培养条件而恢复。 * 4、愈伤组织形态发生 （1）过程：外层细胞分裂，逐渐减慢并停止；内部较深处的细胞开始分裂，而且分裂方向也发生改变，形成维管化组织和瘤状结构。 （2）形态发生方式：器官发生和体细胞胚胎发生。 * 愈伤组织的器官发生 * 愈伤组织的器官发生 * * 愈伤组织的胚胎发生 C白色紧实型愈伤组织;D黄白色松软型愈伤织织:E-F从愈伤织织诱导的胚状体:H胚状体萌发再牛植株 * * * * * （1）注意松散型愈伤组织，表明晶莹透明的发生过程。 （2）如果需要维持生长，应注意愈伤组织的驯化现象，尽量暗培养，可不断地降低降低生长素的浓度。 * * 全能性的表达 * 第三章 植物组织培养的基本原理 * 第一节 植物细胞全能性和细胞分化 一、植物细胞全能性（Totipotency） 1、植物细胞全能性：1902年由Haberlandt提出，即植物体细胞在适当的条件下，具有不断分裂和繁殖、发育成完整植株的能力。 20世纪80年代，认为每一个植物细胞具有该植物的全部遗传信息，在适当条件下可表达出该细胞的所有遗传信息，分化出植物有机体所有不同类型细胞，形成不同类型的器官甚至胚状体，直至形成完整再生植株。 植物细胞全能性的证明是通过1958年Steward等胡萝卜根段细胞体胚发生试验及1964年Guha等进行的曼陀罗花药培养。 * 从一个细胞发育成一个植株 *