基于光波导光模光谱的固液界面受体配体反应动力学.pdfVIP

第30卷，第10R 光谱学与光谱分析 1 and October，2010 20 0年10月 SpectroscopySpectralAnalysis 基于光波导光模光谱的固液界面受体配体反应动力学研究 吴中伟，刘全俊，吴凌伟，谢 骁，陆祖宏。 东南大学生物电子学国家重点实验室，江苏南京210096 摘要为了探讨血管内皮细胞生长因子和其受体作用的动力学特征，在3一氨基3一乙氧基硅烷修饰的光波 导传感器芯片表面通过戊二醛将血管内皮细胞牛长因子同定，用光波导光模光谱法对溶液中的血管内皮细 胞生长因子受体与同定化血管内皮细胞乍长网子作用的反应动力学进行了研究。通过对小同浓度的受体分 子的在线结合、解离的光波导光模光谱数据的分析，拟合出相应的结合、解离反应速率常数分别为6．86× 105 L·(mol·s)1和1．15×10_3S～。结果表明，非标记的光波导光模光谱法适用于高效、准确的受体配体 作用反应动力学特征测埴，所建立的基于光波导光模光谱技术的体外研究模型，是相关药物的开发和作用 机理研究的方便快捷的平台。 关键词光波导光模光谱；血管内皮细胞生长因子；反应动力学；传感器 中图分类号：Q67；TP212．9文献标识码：A 肼7lrl5已成功用于配体诱导转录因子活性调节机理【7]， 引 言 酶相互作用动力学等研究。 endothelialfac— 受体与配体之间的特异性结合是受体或配体分子发挥生 血管内皮细胞生长因子(vascular growth 物学功能的基础，其相互作用动力学研究对于理解牛命过程 tor，VEGF)与相关受体的作用，是内皮细胞的特异性有丝分 本质以及与肿瘤等苇大疾病的治疗和相关药物的开发研究都 裂、血管形成和血管通透性调节，以及肿瘤转移等生理、病 理过程的基础【争u]。为了更深入研究此反应，我们首次用 有重要的意义。放射性配体结合分析(radio-ligandbinding assay)是相对简单而有效的反应动力学研究方法L1]，但其受oWIS法研究了同液界面卜vEGF与其受体的反应动力学 限于不易标记，易发生化学或放射性损伤等缺点[2]。荧光光 特征，借以求得其动力学数据并探讨了有关的反应作用机 谱成像避免了放射损伤问题，但仍要对分析物进行标记，而 理。 且只能进行半定量的测董[3]。 非破坏性、高灵敏度的非标记光谱技术如椭圆偏振光 1实验部分 resonance，SPR)L4J和 谱、表面等离子共振(surfaceplasmon 1．1试剂和仪器 光波导光模光谱(opticalwaveguidelightmodespectroscopy， human OwLS)等为动力学研究提供r新的方法。但是，SPR的不足莺组人血管内皮生长因子(recombinant magneticmode， 之处是它只能测量一个横向磁模(transverse TM)，得到表面结合层的厚度(厶)这一个光学参数，而实际 上要决定结合分子的绝对数最，两个光学参数是必须的，即 药科大学牛命科学与技术学院提供，4一羟乙基哌嗪乙磺酸(4- 表面结合层的厚度(出)和折射率(九A)[s3；IJ时，在生物体系 acid，HEPES)、 中反应物化学势的强烈扰动，使得SPR技