丝状真菌高效表达异源蛋白的研究进展_刘瑞.pdfVIP

生命科学与实验研究 生物技术 世界 丝状真菌高效表达异源蛋白的研究进展 刘瑞 (东北农业大学生命科学学院生物工程专业 黑龙江哈尔滨 150030) 摘要:丝状真菌是一种具有高效分泌蛋白质潜力的真核表达系统,在工业生产中常被用于生产多种生物酶和有机酸。本文综述了当前国内外对于 丝状真菌作为细胞工厂生产异源蛋白的最新探索与进展, 其中包括功能基因组学在蛋白表达与分泌研究中的应用, 同时探讨了异源蛋白表达和生产 的改进策略。 关键词:丝状真菌 蛋白质分泌 异源蛋白表达 功能基因组学 中图分类号:Q949.32 文献标识码:A 文章编号:1674-2060(20 15)06-0026-0 1 丝状真菌在发酵工业中扮演着十分重要的角色,一直用于酶 饰才具有生物活性,没有正确折叠的蛋白质会滞留在内质网中或被 类、抗生素和有机酸等的生产, 尤其在酶制剂工业生产中确立了关 内质网内相关酶系降解掉。细胞自身具有蛋白质折叠的控制机制, 键地位。近几年,丝状真菌的很多重要性质已经被人们研究的十分 而未能正确折叠的蛋白则不能分泌到细胞外。 充分了,丝状真菌由于具有蛋白质细胞外分泌率高、蛋白质表达量 6 丝状真菌形态学因素的影响 大、蛋白质分子修饰程度与高等真核细胞相近、分泌产生的外源蛋 白质有优良的天然活性等特性,在作为生产异源重组蛋白的表达宿 丝状真菌在不同的培养方法下产生的菌体形态不同,对蛋白的 主方面具有巨大的吸引力。 分泌效率也不同。这主要是因为菌体生长改变了培养液的流动性, 为了提高异源蛋白质在丝状真菌中的表达量, 科研人员分别 造成氧气和营养物质在发酵罐中程梯度分布,另外由于菌体的不同 通过不同的方法对异源蛋白在丝状真菌中的表达做出了优化。主要 生长形态导致生物量的不同。这两种因素最终导致发酵液中目的蛋 途径包括以下几方面。 白的生产效率降低。 1 采用丝状真菌内源的强启动子 7 现状与展望 利用宿主自身的强启动子可提高异源蛋白的表达量。在诸多强 利用现代分子生物学技术使得丝状真菌在生产中的价值得到 启动子中最具代表性的是cbh1启动子。研究表明,用里氏木霉发酵 了最大化,但是仍有一些蛋白,尤其是非丝状真菌蛋白,在传统的丝 生产的纤维素酶(主要为外切葡聚糖纤维二糖水解酶 Ⅰ),产量达 状真菌表达系统中尚无法达到理想的预期产量,甚至根本不表达, 40g/L,占里氏木霉发酵液中分泌蛋白总量的50%,比普通工程生产 其原因目前尚不明确。由此可见,对于丝状真菌的分子生物学和生 [1] 理生化特性的研究还有待进一步你的深入。不过从丝状真菌目前已 用的细菌高出上百倍 。cbh1启动子在里氏木霉中有效数为3个,而 且如果拷贝数超过3个并不会增加里氏木霉对目的蛋白产生量,这 经表现出的优良特性来看,我们完全有理由相信:随着对丝状真菌 可能是由于对启动子特异性识别的反式作用因子有限,无法保证3 研究的不断深入,配合更加先进的分子生物学技术手段,丝状真菌 [2] [3] 在作为异源表达宿