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哺乳动物细胞培养简述 1 前言 细胞培养是指通过模拟机体内的生理条件，将从生物机体内取出的器官、组织或细胞等， 在体外进行培养，并使其继续生存、生长和繁殖的过程。严格而言，细胞培养的对象不仅指 各种动物细胞，同时也包含植物细胞，本手册主要讨论动物细胞培养的相关内容，简称细胞 培养。 现代的动物细胞培养始于1907 年，动物学家R.G. Harrison 应用淋巴液做培养基，在 无菌条件下成功培养了蝌蚪的神经板，并观察到神经细胞突起生长的过程；20 世纪40 年代 末、50 年代初，得益于抗生素、胰酶以及各种标准培养基的开发、使用，细胞培养技术取 得迅速发展，至20 世纪 60 年代，各大公司陆续推出各种适宜细胞生长的容器（瓶、皿、 板等），同时进一步改善了细胞培养相关的仪器、试剂等，细胞培养逐渐成为现代生物研究 的基本技术之一，广泛应用于现代生物医学和生物科学研究的各个方面。 细胞培养是研究细胞生命活动规律的一种简单易行的技术，其主要优点如下： （1）培养对象是活的细胞，并且能够实现较好的均一性和线性放大，适宜于各种规模 的研究； （2 ）培养条件可人为改变，并能得到严格的控制，便于研究各种物理、化学等外界因 素对细胞生长、发育和分化等的影响； （3）体外培养的细胞可以通过各种技术进行观察、分析，实验结果便于观察、检测和 记录。 细胞培养虽然具有许多优点，但是也存在一定的局限性，其中最主要的一点是细胞体外 培养的体系与真正的机体内环境并不完全一致，细胞的生物学特性在一定程度上也会发生改 变，因此，体外培养条件下观察到的结果可能并不绝对地符合机体内细胞的真实情况，这一 点在应用培养细胞进行研究时必须充分考虑。 2 体外细胞培养特点与类型 体外培养的细胞主要呈现悬浮型和贴壁型两种状态，并在培养过程中，表现出一些固有 的生长特性：接触抑制和密度抑制、自分泌和旁分泌等，此外，对于贴壁型细胞而言，体外 生长增殖过程中，存在反复贴壁的现象，充分认识这些培养特点，对于维持细胞的正常形态 和生理功能十分重要。 接触抑制是指某些贴壁型细胞在生长过程中因为相互接触而导致一方或双方停止生长 的现象，而当细胞密度进一步增大，细胞汇合成片时，培养体系中的营养成分逐步被细胞消 耗，细胞代谢产物增多，此时细胞分裂停止，并能维持一段时间的静止状态，这一现象即密 度抑制，其细胞密度与培养体系中血清浓度的高低相关。值得提出的是，转化细胞或恶性肿 瘤细胞在培养过程中，因其高分化、增殖能力，通常可以跨越这种限制，而不表现出这些生 长特性。 细胞体外培养的另一个重要特性是自分泌与旁分泌。机体内，细胞分泌物往往通过内分 泌的形式，影响到远处的效应细胞，但是在体外培养体系中，细胞分泌产生的各种因子直接 扩散到培养液中，并以细胞自身为中心，形成一个逐步降低的浓度体系，这些细胞因子不仅 能够影响到邻近细胞的生长，同时对分泌细胞自身的增殖分裂具有促进作用，因此，细胞培 养起始阶段，要求尽可能采用较小的培养体系，增大细胞密度，以实现细胞快速增殖的目的。 反复贴壁是贴壁细胞生长增殖过程中往往被忽视的一个现象。事实上，这一生长特性对 于贴壁细胞的培养至关重要，有时甚至会决定细胞培养方式的选择。贴壁细胞在分裂增殖时， 总是重复进行着分离-分裂-贴壁-再分离-再分裂-再贴壁的循环过程，此时，任何的扰动，对 于细胞的贴壁都可能产生比较大的影响，因此，体外培养细胞的时候，应避免过于频繁地移 动培养容器，以免影响细胞的正常生长。 3 细胞培养基及常用培养试剂 维持细胞在体外正常的生长、增殖需要为其提供适宜的生长环境，其中培养基是细胞生 长所需营养物质的主要来源，而其他各种试剂，包括一些盐平衡溶液、消化液、pH 调整液 等，对细胞培养体系的维持也必不可少。 3.1 细胞培养基 培养基是细胞生长的场所，是提供细胞营养和促进细胞生长的物质基础。培养基主要包 含天然培养基、人工合成培养基以及无血清培养基等。 天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴 液、鸡胚浸出液等。在细胞技术建立早期，基本上所有的细胞培养都采用该类培养基作为细 胞营养物质的来源。血清富含营养，是最有效、最常用的天然培养基。依其来源划分，主要 有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清以及不常用的马血清、鸡血清、羊血清等，其中，胎牛 血清采自剖腹产的胎牛，其受到的外界环境影响最小，血清中所含的抗体、补体等对细胞有 害的成分最