实验大纲-上海交通大学医学院精品课程.doc

上海交通大学 口腔组织病理学实验指导 （第三版) 口腔医学院 2007年6月 前 言 口腔组织病理学是以口腔内细胞和组织的基本结构及病变时的形态改变为主要研究对象的学科。它在口腔基础学科和临床学科之间架起了一座理论和实践相结合的桥梁。口腔组织病理学的进展有赖于不懈地深入研究、实验方法的更新与完善，正如显微镜的发明导致了细胞学说的诞生，电子显微镜的发明打开了超微结构的大门一样。目前随着细胞生物学、免疫学、分子生物学等领域的发展，超微结构观察、免疫组织化学技术、基因扩增技术、原位分子杂交技术等在组织病理学研究领域中获得了广泛的应用，并将越来越多地影响着口腔组织病理学科的发展。 在大学本硕士阶段的教学中，首先应牢固地掌握口腔各组织的形态学结构和改变，然后对整个口腔病理学研究方法概况有所了解，这将会开阔大家的思路 ，提高大家的兴趣，并为今后进行口腔各学科的学习奠定良好的基础。 一、组织病理学的研究方法 (一) 光学显微镜观察 光学显微镜是组织病理学最基本的研究工具，利用它可以在数微米厚的组织切片上对组织排列形态、相互关系以及细胞的形态结构进行观察，从而在组织细胞水平上揭示其生长、发育和病变过程。光学显微镜可分为透射光显微镜、反射光显微镜、偏振光显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、紫外光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等。因研究的目的和对象不同，可应用不同的显微镜。 (二) 电子显微镜观察 透射、扫描等电子显微镜技术是组织病理学研究的重要辅助手段之一，可对细胞及亚细胞的结构进行形态学的研究。分析电镜等技术还可以对蛋白质、核酸等生物大分子结构以及羟磷灰石等无机晶体的结构、成份及含量进行定性和定量的研究。 (三) 组织化学和细胞化学技术 通过应用能与组织和细胞中的化学成份进行特异性反应的物质，可以有助于了解组织细胞内各种蛋白质、酶、核酸、糖原等各类化学成份的变化，从而可揭示其形态学方法所不能观察到的组织细胞化学成份的改变。 (四) 免疫组织化学和免疫细胞化学技术 利用免疫学技术，可以应用相应的细胞待检抗原和特异性抗体结合和显色的方法，来揭示细胞的组织来源及分化程度等。近年来，免疫组织化学技术的蓬勃发展和广泛应用对于病变的临床病理诊断、肿瘤分类、肿瘤病理学的发展起了巨大的推动作用。 (五) 流式显微荧光光度计 该方法主要借助于荧光染色的细胞在稳定的液体中流动，并通过一约100μm的小孔，其流速可达一亿八千万个细胞/小时，依据受激光照射后，发射出的荧光强度等来分类和测定细胞的某种成份的含量，如DNA的量等，从而有助于对细胞成份的定量分析。 (六) 图像分析技术 随着计算机技术的发展，对细胞体积、面积、周长、核浆比等的定量分析变得方便起来。将组织切片(或细胞涂片、照片等)置于显微摄像系统中，将光信号变成计算机能处理的数字信号，并在图像处理软件上进行测量、统计等处理，同时还能对细胞的染色进行灰度测定，因此可有效地进行细胞形态学、细胞化学、免疫组织化学的快速、精确的半定量和定量分析。 (七) 组织与细胞培养技术 包括体外与体内两种方法，体外研究为在37℃的体外环境中，将分散的小块组织或细胞置于特定的培养基中进行培养，对其细胞生长分化、形态和功能变化进行研究；体内研究为将组织细胞植入于动物体腔、皮下或肌肉组织中，利用动物体内的营养进行培养，以观察培养组织的生长、分化和生物学特性。在实验肿瘤病理学的研究中，细胞培养方法尤其具有较高的价值。 (八) 核酸杂交技术 为分子生物学研究的重要手段之一，其原理是根据核酸互补原理，用特定已知顺序的核酸（DNA或RNA）片段作为探针，经标记后与液相或固相中的靶核酸进行杂交，并对其进行检测。尤其是原位分子杂交技术在组织病理学中的应用有重要的实用意义，它可以在组织切片上检测靶核酸的存在，从而使我们能进行原位的定性和半定量的分析。 (九) 聚合酶链反应 聚合酶链反应(PCR)为80年代中叶发展起来的高灵敏度核酸检测方法，其原理为以两段人工合成的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下以待测的DNA为模板，经过多次循环的变性、退火、延伸等，使特定的核酸片段得以大量的复制，从而使其检测灵敏度大大提高。组织病理学研究中广泛应用的有逆转录PCR、原位PCR等，尤其在检测组织细胞中病毒、细菌、遗传缺陷基因和癌基因等方面，PCR发挥了很好的作用。近年来，新兴的实时PCR（Real-time PCR）技术能对核酸的表达进行精确的定量研究。 二、组织病理学实验方法的度量水平 熟悉组织病理学实验中的度量水平，对于理解和分析组织细胞的生长、分化以及肿胀、萎缩等病理形态学改变有很大的帮助。 常用长度单位换算： 1毫米(mm) ＝103微米(μm)＝106纳米(n