应用VEGF防治肢体严重创伤后骨质疏松的实验研究.docVIP

　　应用VEGF防治肢体严重创伤后骨质疏松的实验研究 【摘要】 目的 研究局部应用血管内皮生长因子(vasular endothelial grobs crush injury，and to provide experimental basis for clinical treatment.Methods Animal model of Nebs(distal radius) crush injury ethod) and ly divided into experimental group (local injection id) and the control group (local injecting al sodium)，and each group have 15 Neental group id after limbs crush injury，and control group al sodium.The diversity of regional blood floals ake pathologic detection.Results Regional blood floental group ental group ore.Conclusion Local injection of pHVEGF plasmid can improve regional blood flobs and prevent regional bone rarefaction. Key bs crush injury；blood flo长玻璃管垂直自由下落击于桡腕关节背侧圆形薄铜垫片(直径1.0 cm，重0.5 g)上，打击面积0.35 cm2，致伤量为1 kg/cm2。下落撞击后，见兔尾痉挛性摆动、患肢拖动，显示撞击成功。随机分为实验组(局部注射pHVEGF165质粒)与对照组(局部应用生理盐水组)，每组各15只。实验组于伤后即刻局部(桡骨远端周围)注射pHVEGF165质粒50ug。对照组局部注射生理盐水5 mL。 1.2 pHVEGF165质粒的制备 将pHVEGF165转化为E.coli DHα，经挑单克隆，酶切鉴定正确后，保存菌种，并大量培养，提取质粒备用。使用时用无菌磷酸盐缓冲液(pH＝7.2)溶解稀释。 1.3 观察指标 a)桡骨远端血流量：采用东芝GCA90B超大型数字式γ照相机检查，将探头对准桡骨远端。在肘正中静脉注入99mTcMDP 0.25 mL，荧屏显示放射性核素到达桡骨远端时开始照相，每秒钟一幅，共60幅。该系列图像经 计算 机处理后提供出时间—活动曲线。取活动最高峰出现的时间为动脉相。再自第2 min起每分钟照片一幅，共9幅。经计算机将9幅图像的桡骨远端活度制成斜线，称为静脉相。放射性核素在桡骨远端滞留越多，所画出的斜线向上抬高得越高。经计算机将两组桡骨远端静脉相计算出斜率用于比较其差异。b)桡骨远端骨密度测量：采用法国DMS公司的CHALLENGER双能X射线骨密度检测仪测量桡骨远端骨密度。c)病理组织形态学检查：各组动物治疗后8周处死。取右侧桡骨骨松质于4％多聚甲醛固定48 h，再用10％EDTA在4℃中脱钙3～4周，每周更换1次脱钙液(直到组织变软为止)，最后取标本作石蜡包埋切片。HE染色及甲苯胺兰染色进行病理组织形态学观察。 1.4 数据处理 实验数据用均数±标准差表示，组间差异比较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 桡骨远端血液循环变化 实验组给药后2、4、6、8周桡骨远端行ECT检查，动脉相高峰出现时间较对照组缩短，静脉相斜率明显下降(P＜0.05)。具体比较见表1。 2.2 桡骨远端骨密度比较 实验组与对照组相比，给药后2、4、6、8周骨密度高于对照组(P＜0.05)。具体比较见表2。表1 桡骨远端动脉相高峰出现时间及静脉相斜率比较表2 各组桡骨远端骨密度情况 2.3 病理组织形态学检查 形态学观察实验组骨小梁增多密集，骨形成表面的成骨细胞呈矮柱状或立方状，骨小梁吸收陷窝显著减少(见图1)；对照组骨小梁细小、稀疏断裂而不连接，可见有小梁吸收陷窝，骨形成表面的成骨细胞数目增加，细胞变扁平或立方不规则(见图2)。 3 讨 论 Perren等［1］在接骨板诱发局部骨质疏松的研究中认为，接骨板固定后引起局部血供障碍是导致接骨板下骨质疏松的主要原因。Gunst等［2］对兔完整胫骨接骨板固定后的局部血液循环进行观察，术后即发现板下皮质骨及邻近区域无血流灌注，认为血液循环障碍是导致接骨板内固定术后骨质疏松的原因。我们的实验研究表明动脉血流量下降、静脉瘀滞使皮质骨内微循环血流量明显减少及循环障碍是导致严重肢体创伤后局部骨质疏松的主要