开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制研究.docVIP

　　开口箭皂苷对人神经胶质瘤细胞作用及相关机制研究 作者：蔡晶，雷林生，朱正光，迟德彪 【摘要】 　　目的 探讨开口箭皂苷体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制。方法开口箭皂苷作用于U251细胞后检测其IC50值。溶血实验观察开口箭皂苷对细胞膜的影响。提取U251细胞的DNA分析条带。RT-PCR技术检测开口箭皂苷对U251细胞的bax和bcl-2基因表达的影响。利用激光共聚焦显微技术研究开口箭皂苷对U251细胞内游离钙浓度和pH值的影响。结果开口箭皂苷对U251细胞的IC50值为8.5 μg/ml。不能引起肉眼可见的溶血现象。开口箭皂苷诱发了肿瘤细胞的凋亡，并引起了bax基因表达量的升高和bcl-2基因表达量的下降，并可引起U251细胞内游离钙浓度和pH值的降低。 结论 开口箭皂苷体外可以诱导U251细胞凋亡，其机制可能与上述实验结果有关。　 【关键词】 开口箭皂苷； U251细胞； 凋亡； 机制 　　Abstract：ObjectiveTo investigate the underlying mechanisms of STCB on the apoptotic induction of human neuroglioma cells. MethodsThe inhibitory effect of STCB on U251 cell line olysis of STCB icroscopy and the hydrogenion concentration of U251 cells.ResultsThe 50%inhibiting concentration l. STCB did not cause hemolytic crisis but induced the apoptosis of U251 cells and the hydrogenion concentration of U251 cells. ConclusionThe underlying mechanisms of STCB on the apoptotic induction of U251 cells may be associated entioned above. 　　Key s 开口箭 (Tupistra chinensis Baker)为百合科植物，其根茎具有清热利咽、活血止痛等功效［1～3］。在前期研究中发现提取其中的皂苷部位对小鼠S180肉瘤细胞具有生长抑制及诱导凋亡作用［1］。现进一步探讨开口箭皂苷（Saponin from Tupistra chinensis Baker，STCB）体外对人神经胶质瘤U251细胞的作用和其相关机制，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品与试剂 　　STCB由本实验室自行提取。RPMI-1640培养基，Gibco公司；新生牛血清，杭州市四季青生物工程材料有限公司；Hepes，FARCO化学品供应公司；四苯基氮唑蓝(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)，RNase A，PI（Propidium iodide），Sigma公司；荧光探针Fluo-3-AM,SNAFL（SeminaphthofluorescEin），Molecular Probes Ins；HEPES，MDBio, Inc分装；DEPC，RT-PCR反应体系，杰特伟公司；oligod(T)18，TaKaRa；琼脂糖（Bio Bromide，EB),上海博彩生物工程公司；引物为英骏公司合成。其余试剂均为分析纯。 　　1.2 动物、瘤株与培养器材SPF级豚鼠5只，由南方医科大学实验动物中心提供。人神经胶质瘤U251细胞为本所保存。PETRI培养皿，Corning公司。 　　1.3 体外抗肿瘤细胞增殖实验采用MTT法［4］检测细胞增殖程度。在96孔板中分别加入不同浓度STCB和细胞悬液的混合液培养48 h后，每孔加入2.5 mg/ml MTT 20 μl，继续培养4h后弃去培养液，每孔加入150 μl DMSO振荡10 min后于酶标仪中以570 nm波长检测，测定各孔的光密度值(OD)。抑制率(%)=(1-加药孔平均OD值/对照孔平均OD值)×100%。STCB对细胞的IC50值以Bliss法 计算 。 　　1.4 溶血指数测定根据 　　2 结果 　　2.1 STCB体外抗U251细胞增殖的影响 　　实验结果提示STCB体外对U251细胞的增殖有抑制作用，且随浓度的增加OD570吸光度值相应下降，说明抑制作用相应提高。经 计算 ，半效抑制浓度IC50值为8.5 μg/ml，其可信区间为4.63～12.66 μg/ml。 　　2.2 STCB的溶血作用 　　血细胞悬液与药物混合静置24h