急性和慢性帕金森病大鼠血脑屏障通透性变化的研究.docVIP

　　急性和慢性帕金森病大鼠血脑屏障通透性变化的研究 作者：闫明俞 陈虹 杨赞章 刘斐 【摘要】 目的通过观察帕金森病（PD）大鼠在不同时间点脑组织中伊文斯蓝(EB)含量变化来探讨急性和慢性PD大鼠血脑屏障（BBB）通透性的变化。方法脑立体定向将6羟基多巴胺（6OHDA）注入大鼠右侧纹状体建立PD模型。将大鼠随机分成对照组和模型组，后者又分为6 h，12 h，24 h，4周组，最后一组为慢性PD组。按BELAYEV法使用EB测定BBB通透性。结果急性PD大鼠BBB通透性在6 h达到高峰（Plt;0.01），12 h逐渐下降（Plt;0.05），持续至24 h（Plt;0.05），慢性PD大鼠（4周）与对照组相比无明显差异（Pgt;0.05）。结论急性PD时伴有BBB的通透性增加，而慢性PD时BBB的通透性未见改变。 【关键词】 帕金森病； 血脑屏障； 伊文斯蓝 　　Abstract：ObjectiveTo study the alteration of blood-brain barrier (BBB) easured by EB content in the brain tissue of rats odel area.The rats ly divided into control group and model group.The rats in model group odel.The BBB permeability ethod.ResultsThe BBB permeability reached the peak at hour 6 （Plt;0.01）after 6-OHDA acute lesion,then decreased at hour 12（Plt;0.05）,lasted until 24 h（Plt;0.05）.The BBB permeability of chronic parkinson disease rats had no significant difference as pared eability of BBB ine，DA)能神经元变性死亡［1］，引起纹状体内DA递质含量显著降低。6羟基多巴胺（6hydroxydopamine, 6OHDA）作为DA神经元的化学切断剂，注入脑内可引起DA神经细胞急性损伤致DA含量下降。短期应用可致急性PD模型，长期应用（4～5周）可制作慢性PD模型。我们将6OHDA注入鼠脑右侧纹状体分别建立急性和慢性PD模型，通过测量伤侧脑组织伊文斯蓝(Evens Blue，EB)含量来观察血脑屏障（bloodbrain barrier,BBB）通透性的改变，以探讨BBB的改变在急性和慢性PD发生中的作用。 　 　1 仪器与材料 　　1.1 仪器和试剂脑立体定位仪（美国BAS公司 SAS-4100型），牙科钻（韩国 Strong 90），Varioskan Flash 4.00.51型酶标仪（美国Thermo electron公司），HM202型十万分之一天平，HHS精密电热恒温水浴锅(江苏金坛市医疗仪器厂)，高速冷冻离心机（上海安亭 科学 仪器厂）；6OHDA(sigma 公司)，阿朴吗啡(sigma 公司)，甲酰胺（天津富宇精细化工有限公司），伊文斯蓝(上海新中化学厂生产)，Millipore超纯水系统。 　　1.2 动物分组 健康雄性L：-3.0mm;DV：-3.5 mm）钻一直径为1 mm的小孔，用固定于立体定位仪上的微量注射器延针孔垂直进针。模型组：用10 μl微量注射器抽取6 μl 6OHDA（浓度3 μg/μl,含0.02%Vit C，现配现用）注入右侧纹状体内，注射速度0.5 μl/min，进药后留针15 min，退针5 min。缝合头皮，腹腔注射庆大霉素以预防感染。对照组：接受同样位点的注射，注射生理盐水6 μl（含0.02%Vit C），其他过程同模型组。术后放回笼中，单笼饲养，常规饲料，自由进食、饮水。 　　2.2 行为学检测筛选慢性PD模型 第4组实验鼠（4周组）术后第2周开始经皮下注射新鲜配制的阿朴吗啡（APO）（按0.5 mg/kg给药），检测大鼠旋转行为。每周1次，直至术后4周。手动记数每分钟旋转次数及30 min内旋转总次数。恒定向损伤对侧旋转且旋转圈数超过7 r/min（30 min，210圈）的大鼠视为阳性，连续4周阳性者为合格的慢性PD动物模型。 　　2.3 伊文斯蓝（EB）测定实验鼠在相应的时间点麻醉后，经股静脉注入2%EB生理盐水溶液（2 mg/kg）,几秒钟后大鼠眼球、结膜、四肢等均显示蓝色，表明注入成功。2 h后快速开胸暴露心脏，迅速穿刺左心室后剪右心耳一小孔，用37℃生理盐水