第四章酶工程 酶的化学修饰_提纲_2016.pdfVIP

第四章 酶的化学修饰 4.1 概述 酶分子修饰和改造的原因 稳定性不够，不能适应大量生产的需要 作用的最适条件不符 酶的主要动力学性质的不适应 临床应用的特殊要求 酶修饰的方向 核酸水平 蛋白质水平（化学修饰） 酶分子修饰和改造的概念与目的 概念：采用化学或分子生物学方法，通过主链的切割、剪接和侧 链基团的化学修饰对酶蛋白进行分子改造，以改变其理化性质及生物活 性。 目的：人工改变天然酶的一些性质，创造天然酶所不具备的某些 优良特性甚至创造出新特性，扩大酶的应用领域。 酶分子修饰和改造的方向 对酶分子的侧链基团进行化学修饰 过酶分子与大分子结合的修饰 对酶分子内或分子间进行交联 用化学方法合成具有催化活性的酶，如模拟酶 用分子生物学技术对 DNA 或 RNA 进行分子改造，以获得化学结构 更为合理的酶蛋白。 克隆酶或修饰基因以便产生新的酶 设计新基因合成自然界不存在的新酶 体外分子定向进化：在体外模拟自然进化过程（随机突 变、重组和选择），使基因发生大量变异，并定向选择出所需性质 或功能的新酶。 4.2 酶化学修饰的原理、方法及修饰剂 酶化学修饰的注意点： 1、如何增强酶天然构象的稳定性与耐热性？ 2 、如何保护酶活性部位与抗抑制剂？ 3、如何维持酶功能结构的完整性与抗蛋白水解酶？ 4 、如何消除酶的抗原性及稳定酶的微环境？ 4.2.1 酶化学修饰的原理 利用化学修饰剂所具有的各种基团的特性，直接或间接地经过一定的活化 过程与酶分子的某种氨基酸残基发生化学反应，从而对酶分子的结构进行改 1 造。 化学修饰过程中需考虑的因素 对酶性质的了解：活性部位，稳定条件，侧链基团性质，酶反应最适条 件等； 对修饰剂的要求：分子量，水溶性，活性基团，活化方式，活化条件， 修饰后酶活性的半衰期； 对反应条件的选择：分子比例，反应条件（反应温度、pH 、时间、溶剂 性质、离子强度等） 4.2.2 化学修饰的方法学 1、修饰反应专一性的控制 （1）试剂的选择：修饰目的；反应生成物容易定量测定；试剂大小 选择蛋白质修饰剂需考虑的问题 修饰反应要完成到什么程度 对个别氨基酸残基是否专一 在反应条件下，修饰反应有没有限度 修饰后蛋白质的构象是否基本保持不变 是否需要分离修饰后的衍生物 反应是否可逆 是否适合于建立快速、方便的分析方法 修饰酶活性部位的氨基酸残基的试剂应具备的特征 选择性地与一个氨基酸残基反应 反应在酶蛋白不变性的条件下进行 标记的残基在肽中稳定，很容易通过降解分离出来，进行 鉴定 反应的程度能用简单的技术测定 （2 ）反应条件的选择 要求 不造成蛋白质的不可逆变性 有利于专一性修饰蛋白质