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基因组:生物的整套染色体所含有的全部DNA或RNA序列。
操纵子:一组在基因组中彼此相邻的基因,它们一般参与单一的生化途径,受共同的调控基因调控,作为一个整体来表达。
SNP:在基因组的某些位点上,有些个体只有一个核苷酸与其他个体不同,这种分散在基因组中的单个碱基的差异就称为SNP。
链终止测序法:基本原理:聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)能够把长度只差一个核苷酸的单链DNA分子区分开。起始材料是均一的单链DNA分子。步骤:a.首先由短寡聚核苷酸在每个分子的相同位置上退火,并充当引物合成与模板互补的新DNA链。b.在测序反应体系中加入少量的被不同荧光标记物标记的双脱氧核糖核苷三磷酸(ddNTP)后,合成的互补链可在不同位置随机终止反应,产生一系列只差一个核苷酸的DNA分子。c.通过PAGE电泳可以读出待测DNA分子的序列。
物理间隙:克隆文库中不存在的序列,可能是因为这些序列在所使用的克隆载体中不稳定造成的。
直系同源基因:不同物种生物体间存在的同源物。它们的共同祖先早于物种间的分裂。
Blastx:基于序列比对而判断核酸或蛋白的算法。组蛋白在翻译后的修饰中会发生改变,从而提供一种识别的标志,为其它蛋白与DNA的结 合产生协同或拮抗效应,它是一种动态转录调控成分,称为组蛋白密码(Histone code)。DNA分子末端,为连接实验的设计增加可操作空间。 DNA聚合酶:以现有DNA或RNA分子为模板合成DNA的酶 DNA连接酶: 通过DNA连接酶可以将限制性内切核酸酶消化产生的DNA片段重新连接起来,或者连接到一个新的分子上。 碱性磷酸酶:去掉DNA分子5’端磷酸基团,从而阻止这些分子连接到其他分子上。末端脱氧核糖核苷酸转移酶:属于模板非依赖的DNA聚合酶。
STS作图的原理是:通过对批量的基因组片段进行PCR或杂交分析来对短序列进行定位作图。STS作图两个必须要素:①它的序列必须是已知的,以便于用RCR方法检测该STS在不同DNA片段中存在与否;②STS必须在拟研究的染色体或基因组上有唯一的定位。因此,需要确保STS不位于重复DNA区域。 获得STS途径: ⑴表达序列标签(EST):通过对cDNA克隆测序获得的短序列,代表了表达的基因的一部分。如果EST来自单一序列DNA,不是基因家族中的某一成员,可以被用作STS;⑵简单序列长度多态性(SSLP):如果将被遗传定位的SSLP用作STS进行物理定位,会很有价值,因为它们可以在遗传图谱和物理图谱间提供直接联系;⑶ 随机基因组序列:通过对克隆的基因组DNA随机小片段测序获得。
两种定位某个基因转录起始位点的实验方法1. race法:快速扩展cdna末端。基于PCR技术,由已知的部分CDNA序列来获得完整CDNA序列的一种方法(通过PCR反应快速获得目的序列的5‘端和3’端)。5‘端是:利用在5’端附近的引物进行cDNA合成,退火后向3‘端延伸,延伸结束后利用末端转移酶在3’端加一堆A碱基脱氧核苷酸,然后锚定物连接的是一堆T碱基核算,这样就可以和一堆A碱基互补结合啦2.异源双链分析:在通常电泳条件分离双链DNA时,外加电场拖动DNA链通过凝胶网,迁移率决定于DNA的长度和依电场方向端对端排列的多聚载体浓度, X射线和核磁共振分析显示,在某种条件下互补链中的错配碱基仍在双螺旋内,在另一些条件下则在螺旋外。当外加碱基仍在双螺旋内时,核磁共振测得链的弯曲角度约加。若构象效应由适当长度的连接体扩大时,使链的弯曲度增加,就会妨碍其电泳迁移率。 当错配碱基部位成泡状或桶腰状时,错配碱基仍在双螺旋内不影响其电泳迁移率;若2个碱基的不对称的取代,使得一个碱基仍在螺旋内,另一个在螺旋外,双缘旋将弯曲,可大大改变其构象和电泳迁移率。实验显示,室温条件下,低于使ONA完全变性的乙二醇和甲酞胺的浓度,能使DNA的构象发生微妙的改变,使单碱基错配处的双螺旋弯曲,增加异源双链与同源双链在凝胶中泳动率的差异。?
原核生物和真核生物基因组特征的主要差异:①真核生物有明显的细胞核,核仁,核膜等,而原核生物没有明显的细胞核,只有一个核区; ②染色体的形状,真核生物染色体是线性的,而原核生物是环状、共价、闭合的;③基因组的大小,真核生物大且较疏松,密度小,原核生物小且结构紧密,密度大;④基因的分布,真核生物有内含子,重复序列多,基因间有间隔,而原核生物没有内含子,重复序列比较少见,基因间没有间隔;⑤真核生物基因组的大小和数目不成比例的,而大多数原核生物的基因组都按照类似大肠杆菌的方式紧密排布的,因此基因组的大小和数目是成比例的,
在某一抗病水稻品种中筛选到一个感病植株,且其感病性是可以遗传的,假定抗、感植株的基因组序列完全一致,请利用所学的表观遗传学的知识对这种现象加以解释:若两者的基因组序列完全一致,根据表观遗传学的知
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