断血流皂苷A的药动学研究.docVIP

　　断血流皂苷A的药动学研究 作者：陈娇婷，张道英，王跃生 【摘要】 目的研究断血流皂苷A在大鼠体内的药动学。方法建立柱切换高效液相色谱法测定血浆中断血流皂苷A浓度的方法。色谱条件：预处理柱(PC)：大连装Kromasil C18（20 mm×4 mm，5 μm）；预处理流动相：甲醇-水；预处理流动相流速：1.0 ml·min-1；分析柱(AC)：Lichrospher 100 RP-18e(250 mm×4 mm，5 μm)；分析流动相：甲醇-0.01 mol·ml-1磷酸盐缓冲液(磷酸调pH =3.0)（60∶40）；分析流动相流速：0.6 ml·min-1；分析柱柱温：45℃；检测波长：250 nm。健康大鼠禁食24 h后，尾静脉注射断血流皂苷A溶液，测定不同时间的血药浓度。用3P87药动学程序对血药浓度一时间数据进行拟合。结果大鼠在尾静脉注射断血流皂苷A后，其主要药动学参数为：Vt(0.31±0.05)L·kg-1，CL(1.13±0.32)ml·min-1，Ke(0.90±0.18)h-1，t1/2(0.76±0.11)h，曲线下面积AUC(24.98±4.82)( μg·h) ·ml-1。结论断血流皂苷A在大鼠体内呈一室开放模型，进入体内迅速分布，代谢消除也较快。 【关键词】 断血流皂苷A； 柱切换高效液相色谱法； 药动学 　断血流皂苷A(clinopodiside A)系从断血流中提取的主要成分, 属于齐墩果烷型三萜皂苷类，含量较高，且化学性质稳定，断血流为20世纪70年代从民间验方筛选，经临床验证后被国家药典录入的少数几个单味药之一，其疗效确切，安全性高，被公认为中医临床首选口服妇科止血药。临床上断血流制剂被广泛用于 治疗 各种出血、单纯性紫癜、原发性血小板减少性紫癜等症［1］。近年来，有关断血流的研究主要集中于有效成分的提取、鉴别、药理、药效及临床应用。而断血流药动学研究未见报道。为此，本文参照相关 　　2.6 标准曲线 取空白大鼠血清1 ml，加入上述对照品溶液0.5，0.7，0.9，1.1，1.3，1.5 ml，置于10 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，得到浓度为0.015，0.021，0.027，0.033，0.039，0.045 mg·ml-1的系列对照品溶液。按照“2.3”项下样品处理步骤制备成对照品溶液，在拟定色谱条件下精密吸取10 μl注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(X，μg)对峰面积进行线性回归，得方程为：Y=0.311 3X-0.044 1（r=0.999 5）结果表明断血流皂苷A在15～45 μg·ml-1范围内具有良好的线性关系。 　　2.7 日内和日间精密度 取一定量（高、中、低3种浓度）断血流皂苷A对照品大鼠血浆液，按“2.3”项下样品处理步骤处理，采用断血流皂苷A血浆柱切换高效液相色谱法测定，在1天内连续测定6次，得日内精密度分别为1.22％，0.81％和0.39％(n=6)；连续3 d测定，测得各浓度的日间精密度RSD分别为：1.67％、0.74％和0.45％(n=6)。 　　2.8 重复性实验取断血流皂苷A对照品大鼠血浆液，按“2.3”项下样品处理步骤处理制备6份对照品溶液，采用断血流皂苷A血浆柱切换高效液相色谱法测定，得RSD为2.1％（n=6），表明本方法重复性良好。 　　2.9 样品稳定性实验取一定量（高、中、低3种浓度）断血流皂苷A对照品大鼠血浆样品，分别进行样品处理液稳定性实验：进样条件下样品处理液在5℃放置0，4，10，20，40 h进样分析；样品冷冻放置稳定性试验：－20℃冷冻储藏，分别放置0，6，20，40 d后按“2.3”项下样品处理步骤处理进样分析；室温放置稳定性试验：室温放置0，1，2，4 h后按“2.3”项下样品处理步骤处理进样分析。所用测定结果准确度均在89%～112%范围内，RSD均＜5％，断血流皂苷A在上述条件下均稳定性良好。 　　2.10 净化回收率取一定量（高、中、低3种浓度）断血流皂苷A对照品血浆液，按前述色谱条件测定含量5次，另取相同进样量断血流皂苷A对照品溶液，直接进样测定。按峰面积 计算 ，得血浆净化回收率。结果见表1。表1 净化回收率（略） 　　2.11 方法回收率于空白大鼠血浆中加入一定量（高、中、低3种浓度）断血流皂苷A对照溶液，按“2.3”项下样品处理步骤处理，按前述色谱条件测定含量5次，求出回收量浓度（即实测值）与加入量浓度之比，即为断血流皂苷A血浆空白加样回收率。结果见表2。表2 方法回收率（略） 　　2.12 药动学研究方法随机取大鼠6只。按10 mg·kg-1尾静脉注射断血流皂苷A，给药后5，10，20，50，90，150，240 min时分别从眼眶取血，肝素抗凝，按“2.3”步骤分离血浆，并于