三种常见HBV抗原肽-HLA-A0201复合物四聚体的构建及初步检测应用.pdfVIP

146 • 免疫学杂志第24 卷第2 期 2棚年3 月 IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol. 24 No. 2 Mar. 2008 [文章编号]1胁脱1(2∞8)也0146-04 三种常见 HBV 抗原Jlt-HLA-A 关 0201 复合物四聚体的构建及 初步检测应用 杨新星，却友华，J红晖，宋 娜，刘 贵，陈 玲，杨东亮气华中科技大学同济医院临床免疫研究 室，武汉 43∞30) [摘 要] 目的 体外构建三种常见 HBV 抗原肤.皿A-A 铸但01 复合物四聚体，并初步用该三种四聚体对抗原肤特异性 的细胞毒性T 细胞(口L)进行了初步检测。方法 原核高效表达的 HLA-A 传 ω1-四和ß2m 蛋白，分别和三种 HBV 抗原肤 (HBVCoreI8-刀， Env335-343 , Po1575-583)体外复性折叠成可榕性的阻A-A 赞四l 抗原肤复合物单体，经 BirA 酶作用并通过凝股 过滤层析法纯化复合物单体，分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例搞合构建成相应的三种抗原肤四聚 体。最后进行流式细胞仪检测。结果 Dot-EUSA 和四SA 检测显示获得了三种具有天然构象的生物素化的 HBV 抗原肤­ HLA-A * 0201 复合物单体。构建的三种四聚体均可以检测到相应特异性的口L，在自限性感染患者体内针对乙肝核心抗原 (∞reI8-27) 的口1细胞频敖(0.18%)高于针对聚合酶抗原(阳1575-583)(O. 侃%)和包膜抗原(env335-343) (0.06%)。结论成功 构建了三种具有完整构象的生物素化 HBV 抗原肤·皿Â-A 铸但01 复合物单体，所构建的三种四聚体都可以检测到抗原特异性 的口Lo [关键词] HBV 抗原肤-皿Â-A 祷但01 单体;T 淋巴细胞;四聚体 [中固分类号] R392 [文献标识码] A Construction and primary application of thr臼 kinds of HBV-HLA-A 铸但01-peptide t由回ners YANG Xin-xing , HAO You-hua , DING Hong-hui , SONG Na，口U 剧， CHEN li吨， YANG Dong-liang (Division 01 Clinical ITTlITULnology , Tongji Hospital ， 岛ngji Medical College , Hun.动。咱 University 01 Science and Technology , wí础an 43∞30 ， China) [A胎tractJ Objective To construct 也ree sol山，le HBV-四A-A 铃 0201-peptide ∞mplexes and det刨出e HBV-specific 句totoxic T lym- ph州回(口L) by using 由.e COll8tructOO 阻品加但01-r:叩tide te国mers. M咄咄Proteins of HLA-A铸 0201-BSP and ß2m were obtainOO 问r e:ffective prokaryotic e邓陀臼ion. After bei吨 P山诅00， the proteins we陀陀foldOO into 皿A-A 势倪。l-ß2m-peptide complexes in the pr，甜nce d 由ree antigenic peptides (He归.titis B 世rus CoreI8-27 , Env335-343 , and Po1575-583) by dilution 阳出叫.咀le complexl臼 then were biotiny- h时by BirA enzyrne and purified via 由e gel- filtration 啦。mato伊.phy. Telramers were generatOO by mixing 由∞mplex wi由 PE - Streptavidin at a molar ration of 5 : 1. Then analysis of stained PBMCs wωperfom时四，ing FACScan and CellQu耐副食ware. R回曲币le biotinylated 皿Â-A 骨 0201 complex回 we陀