第十二章DNA合成精要.ppt

* DNA RNA 生物遗传信息传递的化学本质，在分子水平看就是： 复制本质：遗传信息全部 传递给子代DNA分子。随 分裂DNA进入子细胞，通 过表达的蛋白质控制生长 发育。 蛋白质 转 录 翻 译 生理功能 蛋白质是生命活动 的体现者，不同时 期DNA表达不同蛋 白质从而控制整个 生命活动过程。 第十二章 核酸的生物合成 DNA复制的化学本质和机制 如何？ DNA复制的化学本质和机制 如何？ DNA复制的化学本质和机制 如何？ 复 制 复 制 复 制 DNA的半保留复制 DNA复制的起点和方式 DNA聚合反应有关的酶 DNA的半不连续复制 DNA复制的过程 真核生物DNA的复制 本章内容 中心法则 第一节 DNA生物合成的一般规律 一、半保留复制及证据 二、DNA复制的起点和方向 三、DNA是半不连续复制的 第二节 DNA聚合酶 一、参与DNA复制的酶和辅助因子 第三节 细胞DNA复制的阶段 一、DNA复制的起始 二、DNA复制的延长 三、DNA合成终止过程 二、DNA聚合酶Ⅰ或Ⅲ反应中心链延长机制 第一节 DNA生物合成的一般规律 DNA复制：以亲代DNA分子为模板指导合成相同的子代DNA分子的过程。 亲代DNA作模板 新合成的子链DNA片段 DNA复制 半保留复制：亲代DNA双链解开，分别作为模板指导合成互补的DNA链，在子代DNA中一条链来自于亲代DNA，另一条链是新合成的。DNA 的这种复制方式称为半保留复制。 一、半保留复制及证据 实验1：1958年 Meselson 和 Stahl利用氮的同位素15N标记大肠杆菌DNA，首先证明了DNA的半保留复制。 E.coli，15NH4Cl为唯一氮源，培养12代，从而使所有E.coli DNA标记上15N。 15N-DNA 比 14N-DNA的密度大。 氯化铯密度梯度离心 ?  亲代 F1 ? ?  ? ? ? 15N ?  F2 ? ? ? ? 用15N-NH4Cl为唯一碳源连续培养多代 用含14N培养基培养1代后 15N/ 15N重DNA 用含14N培养基培养2代后 14N/ 15N杂合DNA 14N/ 14N轻DNA 14N/ 15N杂合DNA 密 度 梯 度 增 加 实验2： 1963年Cairns用放射自显影（autoradiograph）的方法第一次观察到完整的正在复制的大肠杆菌染色体DNA. 3H-dTTP标记大肠杆菌DNA，经过将近两代时间。 溶菌酶消化细胞壁 放射自显影 B C 二、DNA复制的起点和方向 研究证明许多DNA复制是从固定的起点开始，在复制起点处存在有 多个富含A-T对的回文序列列结构。并有多种蛋白和酶参与DNA复制的 起始过程。 复制起点 复制起始有关蛋白作用下复制起点部分双螺旋双链解开，分别作模板指导新链合成。 DNA复制是边解链边复制，复制点呈分叉状，分叉点称为复制叉。解链部分称为复制眼； 复制叉 复制叉 复制叉 复制叉 复制叉 复制叉 亲代DNA 亲代DNA 复制起点 复制起点 复制叉会合处复制终点 连续合成 复 制 不连续合成 复制泡的两个复制叉向相反方向移动，双链不断解开， 复制不断向两侧推进。新合成的子代链与亲本链互补，并 形成双螺旋结构的子代DNA。 三、DNA是半不连续复制的 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 3′ 5′ 复制叉移动方向 新链合成是从5′→3′端进行的其中一条链从起始点开始连续合成，并与复制叉前进方向一致——前导链 另一条链合成方向虽相同，但是不连续合成的，即先合成冈崎片段，然后再连接成完整的子链——滞后链（后随链） 冈崎片段 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 3′ 5′ 复制叉移动方向 复制叉移动方向 冈崎片段 冈崎片段 3′ 5′ DNA后随链合成过程： 引物RNA 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 引物RNA 引物RNA 3′ 5′ 5′ 引物RNA 5′ 引物RNA 5′ 引物RNA 3′ 3′ 3′ 3′ 5′ 3′ 3′ 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ 3′ DNA链接酶 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅲ 大肠杆菌 (E.coli)在含有 3H-dTTP的培养液中，定期取样小心