RNA干扰完整浅析.pptVIP

* RNA的干扰 第一组 组员： 郭琪芳 马耀慧 RNA的干扰 RNA干扰的概念 RNA干扰的作用机制 RNA干扰的应用 RNA 干扰 RNA干扰存在的问题 什么是RNA干扰？ 英文：RNA interference，缩写RNAi 。 概念：是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象，是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象 RNAi的作用机制 基因沉默 基因沉默分为转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类: TGS是指转基因在细胞核内RNA合成受到了阻止而导致基因沉默； PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。 dsRNA介导的同源性靶mRNA降解过程 第一步（起始阶段）是较长dsRNA在ATP参与下被Dicer切割加工成21~23nt的由正义和反义链组成的小干扰RNA。 RNAi过程的功能单元：siRNA siRNA的两条单链末端为5’-磷酸和3’-羟基，且3’端均有2~3个突出的核苷酸。 Dicer siRNA具有低分子质量、低浓度、沉默信号可在细胞间传递甚至传播至整个有机体以及可遗传等特点。而大于30bp的dsRNA可引起机体非特异性干扰素样反应和蛋白激酶(PKR)的激活而使其被降解，从而大大减少了其对mRNA的抑制作用。 。 第二步（效应阶段）是 siRNA 在 ATP参与下被 解旋酶解旋成单链，并由其中反义链指导形成 诱导的沉默复合体。在ATP 酶的作用下，活化的 RISC 以单链 siRNA 为向导识别同源性的单链靶mRNA ，并在距离RISC 的3` 端11个碱基位置切割靶mRNA ，导致靶基因的沉默。 应用： RNAi主要通过在转录后 （post-transcriptional）水平阻断基因的表达，导致蛋白无法合成，出现“基因沉默”。比如，我们可以按拟定的方式来关闭（shutting off）非必需或致病基因的功能。从理论上说，若能关闭致病基因的表达则很多疾病将被治愈。动物实验已证明，可以通过RNAi的方法使导致血胆固醇升高的基因“沉默”；病毒性疾病，眼疾，心血管代谢性疾病等方面的临床试验也正在进行中；这一方法为病毒性肝炎、艾滋病和肿瘤等人类顽疾的治疗指了一条新路 。 药物开发 RNAi的应用领域 病毒性疾病的治疗 基因功能研究 2 4 1 肿瘤治疗 3 1）基因功能研究 由于RNAi技术可以利用siRNA使目的基因沉默，研究基因的功能。同时siRNA表达文库构建方法的建立，使得利用RNAi技术进行高通量筛选成为可能，对阐明信号转导通路、发现新的药物作用靶点有重要意义。  2）病毒性疾病的治疗 RNAi 机制作为真核生物基因组免疫系统, 抑制外源和内源有害基因表达。利用RNAi 技术把与病毒基因具同源性的siRNA 引入感染细胞将会抑制病毒的增殖。利用RNAi 技术抑制过度表达的癌基因将会使癌症表型逆转或病程得以控制。 研究人员开发出使用RNAi技术来阻止艾滋病病毒进入人体细胞。这个研究小组设计合成的lenti病毒载体引入siRNA，激发RNAi抑制了HIV-1的coreceptor(辅助受体)-CCR5进入人体外周Ｔ淋巴细胞，不影响另一种HIV-1的coreceptor-CCR4，从而使以lenti病毒载体为媒介引导siRNA进入细胞内产生了免疫应答，由此治疗HIV-1和其他病毒感染性疾病的可行性大大增加。 。 Randall等证明了针对 HCV(丙型肝炎病毒) RNA的siRNA转染细胞4天后可使细胞质中复制的 HCV RNA降低80倍；将siRNA 转染至已有HCV感染、复制的细胞，siRNA对98%以上可检测到HCV抗原、HCV复制活跃的细胞有抑制作用；siRNA干扰沉默 HCV RNA具有剂量依赖性和序列特异性。Kapadia等也证明了siRNA特异抑制 HCV RNA复制、阻止相关蛋白表达的作用。 Fig3.RNAi的抗病毒机制 *